摘要: 摘要應用免疫學方法檢測了格林-巴利綜合征(GBS)病人和正常對照組各30例的血清中髓鞘脂自身抗體含量，并進行了動態觀察。結果顯示，GBS病人血清中髓鞘脂自身抗體水平明顯高于正常對照組(P＜0。GBS患者髓鞘脂自身抗體出現的陽性率為20%。動態觀察發現，GBS患者血清中髓鞘脂自身抗體水平的下降與臨床癥狀的改善相一致。...
Serum level of anti-myelin sheath antibody in patients with Guillain-Barre syndrome
qI Qixue,LI Yufen(Laboratory of Neurology,The First Clinical college,China Medical University,Shenyang 110001)
Abstract To determine the serum anti-myelin sheath antibody in 30 patients with guillain-Barre syndrome and 30 healthy subjects.A dynamic observation was performed in 5 patients with GBS.The result showed that the serum antimyelin sheath antibody increased signiflcantly in patients with GBS,compared with normal control(P＜0.01).The positive rate of serum antimyelin sheath antibody titers in GBS patients was 20%,dynamic observation shows that the decrease of serum anti-myelin sheath antibody is correlated with clinical symptomatic improvement.
Key words Guillain-Barre syndrome； antimyelin sheath antibody
格林-巴利綜合征(Guillain-Barre syndrome,GBS)的病因及發病機制至今尚不很清楚。近年來國外學者在GBS發病機制方面作了深入研究，推測是機體對自身周圍神經髓鞘的異常免疫反應所致［1，2］。在髓鞘脂自身抗體的研究方面，國外已取得了較大的進展，發現GBS患者血清中髓鞘脂自身抗體水平升高，以神經節苷脂抗體增高為主。為探討抗髓鞘脂的自身抗體在GBS發病中的作用，我們檢測了30例GBS患者血清中髓鞘脂自身抗體水平。
1 材料與方法
1.1 檢測對象 30例GBS病人，男性17例，女性13例，年齡16～58(歲)，平均年齡31±11.8(歲)，全部符合Asbury1990年修訂的診斷標準［3］。正常對照組系健康志愿者，共30例，男16例，女14例，年齡22～43(歲)，平均年齡31.8±5.5(歲)。病人首次采血均在發病后7～15(天)進行。兩組性別、年齡匹配有可比性。
1.2 臨床分級 按照Asbury 1990年修訂的診斷標準將病人分為5級［3］：0級健康；1級癥狀、體征輕微，可行走或進行日常工作；2級可獨立行走5 m；3級需扶助行走5 m；4級需臥位或臥椅；5級需輔助人工通氣。
1.3 檢測方法
1.3.1 標本采集 取GBS病人和健康志愿者靜脈血各3 ml，凝固后離心2 000 r/min分離血清。將待測血清儲－80°C。對30例GBS患者首次采血時間在7～8(天)內進行，其中16例住院治療后第4周采血進行動態觀察。
1.3.2 試劑與儀器 髓鞘脂標準品(Sigma公司)、辣根過氧化物酶標記羊抗人IgM結合物(北京生物制品研究所)，所用的化學試劑均為分析純。Sigma960型酶標測定儀、波長490 nm。
1.3.3 抗原的制備與標定 將新鮮人坐骨神經100 mg去除神經鞘膜及外周組織，裝入勻漿器中，加3倍容積的蒸溜水，在冰浴中勻漿。在勻漿液中加入10倍容積的甲醇，20°C下邊攪拌邊注入5倍體積的氯仿。經2000 r/min離心10 min后、收集上清液。將得到的沉淀用4倍體積的蒸溜水再懸浮后加入15倍體積的氯仿-甲醇(1∶2)。此混合物再2000 r/min離心10 min，將上清液收集在一起，注入旋轉蒸發器在40°C下蒸發，得到神經髓鞘脂。將其與髓鞘脂標準品分別進行稀釋，進行薄層層析，用間-苯二酚染色，對提取的髓鞘脂進行標定。提取的髓鞘脂與標準品均被染色、兩者位于同一高度，說明提取的人坐骨神經髓鞘脂即為髓鞘脂。其分子量為845 kD。此抗原髓鞘脂為白色板狀結晶，可溶于熱甲醇、熱乙醇、氯仿，不溶于乙醚、丙酮。在水中形成乳濁液。
1.3.4 髓鞘脂自身抗體的檢測 提取的人坐骨神經髓鞘脂為抗原，用包被緩沖液1∶100稀釋，在聚苯乙烯微量反應板的每孔加0.2 ml。4°C過夜，用洗滌液洗3次。設復孔、空白孔，每孔加入100倍稀釋的待測血清0.2 ml，4°C 4 h后加入新配制的1 000倍稀釋的辣根過氧化物酶羊抗人IgM結合物每孔0.2 ml，最后以0.5 mol/L H2SO4終止反應，用酶標儀測定A值。
1.3.5 統計學方法 A值用
2 結果
2.1 GBS組與正常對照組血清中髓鞘脂自身抗體水平比較(
2.2 GBS病人病癥嚴重程度與血清中髓鞘脂自身抗體水平之間的關系，血清中髓鞘脂自身抗體水平，病情屬于4～5級者(0.351±0.043)高于1～3級者(0.310±0.142)。病情重者髓鞘脂自身抗體水平高于病情輕者，但各級別間的差別不顯著，無統計學意義(P＞0.05)。
2.3 患者血清中抗體值的動態變化 對30例GBS患者中的16例住院患者進行了抗體值的動態觀察。患者入院首次采血后，每隔7～10(天)采血1次,計4次。結果16例中5例髓鞘脂自身抗體呈陽性者列于表1。從這5例患者抗體值的變化，發現隨著臨床癥狀的改善其抗體值的水平逐漸下降。從表1中可見第3例患者入院后肢體癱瘓加重并伴呼吸困難、抗體值上升，經治療病情好轉后抗體值又逐漸下降。
表1 血清髓鞘脂自身抗體陽性GBS病人抗體A值動態變化
Table 1 Dynamic changes of antibody A value in GBS patients whose serum antimyelin sheath antibody in positive
| Case | number of times(A value) | |||
| 1 | 2 | 3 | 4 | |
| 1
2 3 4 5 |
0.868
0.479 0.302 0.687 0.568 |
0.468
0.467 0.490 0.308 0.456 |
0.348
0.379 0.248 0.282 0.281 |
0.157
0.188 0.149 0.174 0.106 |
3 討論
本文觀察到GBS病人髓鞘脂自身抗體水平增高，因而髓鞘脂自身抗體水平的檢測可做為GBS診斷提供一個有意義的依據。髓鞘脂自身抗體水平在GBS病程中的動態變化，Quarles等人［4］有報告但病例不多。本文30例GBS病人中6例抗體值陽性，4例入院后隨著癥狀的好轉、肢體功能的恢復，抗體值逐漸下降；另1例隨著病情先加重后好轉，其抗體值在入院后先上升后下降。這提示GBS病人抗體值的變化與臨床癥狀的改善相一致。髓鞘脂自身抗體水平變化的觀測，可能對了解GBS病人的發病機理、治療效果及預后有一定的臨床意義。
參考文獻
1 Winer J B,Hughes R A C,Osmond C.A prospective study of acute idiopathic neuropathy I.Clinical features and their prognostic value.J Neuro Neurosurg psychiat,1988，51(5)：605
2 Brosnan C F,Claudio L,Tansey F A,et al.Mechanisms of autoimmune neuropathies.Ann Neurol,1990,27(Suppl):S 75
3 Asbury A K.Guillain-Barre Syndrome:historical aspects.Ann neurol,1990,27(Suppl):S2
4 Quarles R H,llyas A A,Willison H J.Antibodies to gangliosides and myelin protein in Guillain-Barre syndrome.Ann Neurol,1990,27(Suppl):S 48
