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格林-巴利綜合征患者血清中髓鞘脂自身抗體水平的測定

來源:臨床檢驗雜志 作者:戚其學… 2009-2-21
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摘要: 摘要應用免疫學方法檢測了格林-巴利綜合征(GBS)病人和正常對照組各30例的血清中髓鞘脂自身抗體含量,并進行了動態觀察。結果顯示,GBS病人血清中髓鞘脂自身抗體水平明顯高于正常對照組(P<0。GBS患者髓鞘脂自身抗體出現的陽性率為20%。動態觀察發現,GBS患者血清中髓鞘脂自身抗體水平的下降與臨床癥狀的改善相一致。...


摘要 應用免疫學方法檢測了格林-巴利綜合征(GBS)病人和正常對照組各30例的血清中髓鞘脂自身抗體含量,并進行了動態觀察。結果顯示,GBS病人血清中髓鞘脂自身抗體水平明顯高于正常對照組(P<0.01)。GBS患者髓鞘脂自身抗體出現的陽性率為20%。動態觀察發現,GBS患者血清中髓鞘脂自身抗體水平的下降與臨床癥狀的改善相一致。

Serum level of anti-myelin sheath antibody in patients with Guillain-Barre syndrome

  qI Qixue,LI Yufen(Laboratory of Neurology,The First Clinical college,China Medical University,Shenyang 110001)

  Abstract To determine the serum anti-myelin sheath antibody in 30 patients with guillain-Barre syndrome and 30 healthy subjects.A dynamic observation was performed in 5 patients with GBS.The result showed that the serum antimyelin sheath antibody increased signiflcantly in patients with GBS,compared with normal control(P<0.01).The positive rate of serum antimyelin sheath antibody titers in GBS patients was 20%,dynamic observation shows that the decrease of serum anti-myelin sheath antibody is correlated with clinical symptomatic improvement.

  Key words Guillain-Barre syndrome; antimyelin sheath antibody

  格林-巴利綜合征(Guillain-Barre syndrome,GBS)的病因及發病機制至今尚不很清楚。近年來國外學者在GBS發病機制方面作了深入研究,推測是機體對自身周圍神經髓鞘的異常免疫反應所致[1,2]。在髓鞘脂自身抗體的研究方面,國外已取得了較大的進展,發現GBS患者血清中髓鞘脂自身抗體水平升高,以神經節苷脂抗體增高為主。為探討抗髓鞘脂的自身抗體在GBS發病中的作用,我們檢測了30例GBS患者血清中髓鞘脂自身抗體水平。

  1 材料與方法

  1.1 檢測對象 30例GBS病人,男性17例,女性13例,年齡16~58(歲),平均年齡31±11.8(歲),全部符合Asbury1990年修訂的診斷標準[3]。正常對照組系健康志愿者,共30例,男16例,女14例,年齡22~43(歲),平均年齡31.8±5.5(歲)。病人首次采血均在發病后7~15(天)進行。兩組性別、年齡匹配有可比性。

  1.2 臨床分級 按照Asbury 1990年修訂的診斷標準將病人分為5級[3]:0級健康;1級癥狀、體征輕微,可行走或進行日常工作;2級可獨立行走5 m;3級需扶助行走5 m;4級需臥位或臥椅;5級需輔助人工通氣。

  1.3 檢測方法

  1.3.1 標本采集 取GBS病人和健康志愿者靜脈血各3 ml,凝固后離心2 000 r/min分離血清。將待測血清儲-80°C。對30例GBS患者首次采血時間在7~8(天)內進行,其中16例住院治療后第4周采血進行動態觀察。

  1.3.2 試劑與儀器 髓鞘脂標準品(Sigma公司)、辣根過氧化物酶標記羊抗人IgM結合物(北京生物制品研究所),所用的化學試劑均為分析純。Sigma960型酶標測定儀、波長490 nm。

  1.3.3 抗原的制備與標定 將新鮮人坐骨神經100 mg去除神經鞘膜及外周組織,裝入勻漿器中,加3倍容積的蒸溜水,在冰浴中勻漿。在勻漿液中加入10倍容積的甲醇,20°C下邊攪拌邊注入5倍體積的氯仿。經2000 r/min離心10 min后、收集上清液。將得到的沉淀用4倍體積的蒸溜水再懸浮后加入15倍體積的氯仿-甲醇(1∶2)。此混合物再2000 r/min離心10 min,將上清液收集在一起,注入旋轉蒸發器在40°C下蒸發,得到神經髓鞘脂。將其與髓鞘脂標準品分別進行稀釋,進行薄層層析,用間-苯二酚染色,對提取的髓鞘脂進行標定。提取的髓鞘脂與標準品均被染色、兩者位于同一高度,說明提取的人坐骨神經髓鞘脂即為髓鞘脂。其分子量為845 kD。此抗原髓鞘脂為白色板狀結晶,可溶于熱甲醇、熱乙醇、氯仿,不溶于乙醚、丙酮。在水中形成乳濁液。

  1.3.4 髓鞘脂自身抗體的檢測 提取的人坐骨神經髓鞘脂為抗原,用包被緩沖液1∶100稀釋,在聚苯乙烯微量反應板的每孔加0.2 ml。4°C過夜,用洗滌液洗3次。設復孔、空白孔,每孔加入100倍稀釋的待測血清0.2 ml,4°C 4 h后加入新配制的1 000倍稀釋的辣根過氧化物酶羊抗人IgM結合物每孔0.2 ml,最后以0.5 mol/L H2SO4終止反應,用酶標儀測定A值。

  1.3.5 統計學方法 A值用

  2 結果

  2.1 GBS組與正常對照組血清中髓鞘脂自身抗體水平比較(

  2.2 GBS病人病癥嚴重程度與血清中髓鞘脂自身抗體水平之間的關系,血清中髓鞘脂自身抗體水平,病情屬于4~5級者(0.351±0.043)高于1~3級者(0.310±0.142)。病情重者髓鞘脂自身抗體水平高于病情輕者,但各級別間的差別不顯著,無統計學意義(P>0.05)。

  2.3 患者血清中抗體值的動態變化 對30例GBS患者中的16例住院患者進行了抗體值的動態觀察。患者入院首次采血后,每隔7~10(天)采血1次,計4次。結果16例中5例髓鞘脂自身抗體呈陽性者列于表1。從這5例患者抗體值的變化,發現隨著臨床癥狀的改善其抗體值的水平逐漸下降。從表1中可見第3例患者入院后肢體癱瘓加重并伴呼吸困難、抗體值上升,經治療病情好轉后抗體值又逐漸下降。

表1 血清髓鞘脂自身抗體陽性GBS病人抗體A值動態變化

  Table 1 Dynamic changes of antibody A value in GBS patients whose serum antimyelin sheath antibody in positive

Case number of times(A value)
1 2 3 4
1

  2

  3

  4

  5

0.868

  0.479

  0.302

  0.687

  0.568

0.468

  0.467

  0.490

  0.308

  0.456

0.348

  0.379

  0.248

  0.282

  0.281

0.157

  0.188

  0.149

  0.174

  0.106

  3 討論

  本文觀察到GBS病人髓鞘脂自身抗體水平增高,因而髓鞘脂自身抗體水平的檢測可做為GBS診斷提供一個有意義的依據。髓鞘脂自身抗體水平在GBS病程中的動態變化,Quarles等人[4]有報告但病例不多。本文30例GBS病人中6例抗體值陽性,4例入院后隨著癥狀的好轉、肢體功能的恢復,抗體值逐漸下降;另1例隨著病情先加重后好轉,其抗體值在入院后先上升后下降。這提示GBS病人抗體值的變化與臨床癥狀的改善相一致。髓鞘脂自身抗體水平變化的觀測,可能對了解GBS病人的發病機理、治療效果及預后有一定的臨床意義。

  參考文獻

  1 Winer J B,Hughes R A C,Osmond C.A prospective study of acute idiopathic neuropathy I.Clinical features and their prognostic value.J Neuro Neurosurg psychiat,1988,51(5):605

  2 Brosnan C F,Claudio L,Tansey F A,et al.Mechanisms of autoimmune neuropathies.Ann Neurol,1990,27(Suppl):S 75

  3 Asbury A K.Guillain-Barre Syndrome:historical aspects.Ann neurol,1990,27(Suppl):S2

  4 Quarles R H,llyas A A,Willison H J.Antibodies to gangliosides and myelin protein in Guillain-Barre syndrome.Ann Neurol,1990,27(Suppl):S 48



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