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評估放免試驗效果的幾點體會

來源:INTERNET 作者:任立平 2005-7-20

摘要: 現就如何評估每次放免試驗效果談幾點體會。1 試劑盒質量的評估隨著放免檢驗技術的普及與發展,藥盒生產廠家也日益增多,其中的質量良莠不齊,因此我們應掌握一套簡單地評估藥盒質量的方法。1 非特異性結合率(NSB) 即只含有標記抗原而不含抗體和待測物(標準品)管的結合率。(2)試管內壁的光滑度及保護蛋白的濃度。...


任何檢驗方法都具其質控辦法,歸納起來不外乎于有關精密度、準確度、特異性及重現性等幾方面。放免亦如此,但這些指標計算起來比較繁瑣,只適合于方法學的研究和藥盒廠家。在實際工作中很難做到,尤其放免檢驗,因其受試劑數量的限制,藥盒也昂貴。現就如何評估每次放免試驗效果談幾點體會。

1 試劑盒質量的評估

隨著放免檢驗技術的普及與發展,藥盒生產廠家也日益增多,其中的質量良莠不齊,因此我們應掌握一套簡單地評估藥盒質量的方法。

1.1 非特異性結合率(NSB) 即只含有標記抗原而不含抗體和待測物(標準品)管的結合率。一般要求:二抗作為分離劑的方法應<5%,PEG十二抗的方法不能>10%。NSB升高常見的原因有:(1)由于標記物放射性自損傷,脫碘所致;(2)試管內壁的光滑度及保護蛋白的濃度;(3)分離劑的濃度過高。因此可作為衡量標記物質量的一個指標。

1.2 “Bo”結合率 也稱反應最大結合率即標記抗原與相應的限量抗體反應達到平衡時的結合率,一般要求在30%~70%之間。Bo結合率過高主要原因有:抗體濃度相對過高或分離劑濃度過高,這樣會影響試驗方法的靈敏度。Bo結合率降低主要原因有:抗體濃度偏低,標記抗原部分失活,分離劑濃度偏低及反應未達到平衡狀態等。是衡量標記物及抗體質量的有用指標。

1.3 ED 25 、ED 50 、ED 75 的測定監測曲線的漂移情況 即試劑盒的穩定或重現性。競爭放免分析的曲線不論是四參數擬合,還是logit擬合均呈反“S”型,不是一條直線,因此需要高、中、低三點來確定曲線的性質。我們在實際工作中會遇到以下幾種情況,標準曲線右移說明標準品有部分失活,曲線左移示標記抗原部分失活,同前幾次實驗比較曲線間有部分重疊或交叉一般是由于操作誤差所致。

1.4 替代比例 標準品最低濃度點與最高濃度點結合率之比,一般要求>4。其反應是曲、線斜率,一定程度上也反映了試驗方法的靈敏度和工作范圍。一個良好的試劑盒低濃度點的結合率應在80%以上,最高濃度點的結合率應<20%(指標準物的濃度而言)。但有時由于試劑保存不當如反復凍溶,或放置室溫時間過長等因素,可使標準品完全或部分失活使曲線呈高平線,標記抗原失活導致低平線。

2 工作人員本身的質量控制

主要包括樣品的預處理、加樣誤差,結合與游離部分的分離是否完全,測量誤差及工作人員的工作作風和責任心等方面。這里我只談一下加樣誤差及質控血清的應用。

2.1 精密度的控制 精密度是衡量隨機誤差的主要指標,有條件的實驗室可用精密度圖來控制。這里介紹一種簡單 的方法來評估由于加樣而引起的隨機誤差即復管的一致性。具體的計算方法是:|x 1 -x 2 |2ˉx ×100%=|x 1 -x 2 |ˉx ×100%,此值要求<10%實際上就是該劑量點的變異系數。式中的x 1 和x 2 分別是某一劑量點(待測標本)復管的CPM計算值,為其平均值。復管的一致性主要反應的是工作人員的加樣誤差。若此值>10%的話,則應作為“壞點”剔除。也有人用“反應誤差相關”RER來表示,但其反應的是整體誤差,決定整批試驗的取舍,在實際工作中由于放免試劑較貴,數量的限制,計算也較復雜,本人趨向于采用前者(要求RER值<0.04)。

2.2 質控血清的應用 質控血清是我們檢驗工作中最有效,最有用的指標之一。(1)高、中、低濃度3個質控血清6個測定值(復管),一般情況下有的高于期望值,有的低于期望值,且均在ˉx±2s范圍內,這種情況說明無明顯異常。(2)6個測定值中有較多超過期望值的ˉx±2s,甚至ˉx±3s,但無偏向一側的趨勢,說明隨機誤差太大。若前述復管精密度無異常應考慮會棄全部數據,重作試驗。(3)6個測定值中大多數偏向期望值一側,且取三個質控血清各自測定值的均數,結果均偏向一側,則提示有系統誤差。若有下列情況之一者,應考慮會棄整批數握。①3個均數中有一超過期望值的ˉx±3s;②3個均值中有兩個均值超過期望值ˉx±2s;③3個均值均超過ˉx±s。(4)若兩個質控樣品正常,而另一個質控樣品測定值均明顯偏向一側且相當一致。原因可能是標準曲線問題,也可能是質控血清變質所致。

作者單位:101300北京首都醫科大學順義校區檢驗系

(收稿日期:2003-11-01)

(編輯宓士軍)


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