摘要: 【摘要】 目的 探討不同洗板方式的酶聯免疫法對HBsAg結果的影響。方法 在日常工作中，伴有溶血或其它因素引起渾濁的血清樣品較為常見，而這些樣品在HBsAg的ELISA檢測中常出現假陽性，為消除這些假性結果。采用同一種試劑盒對陽性結果通過不同的方法進行重復測定分析。結果 引起假陽性結果主要來源于有溶血或渾濁的血清，......
關鍵詞 ELISA HBsAg 洗板方式 假陽性
Study on the influence of HBsAg results with ELISA of different cleaning the troughs Mo Haolian
The Futian Center for Disease Prevention and Control，Shenzhen518033.
【Abstract】 Objective To study the influence of HBsAg results with ELISA of different cleaning the troughs Methods The hemolysis or feculent serum samples is frequent in the ordinary work.The HBsAg test by ELISA of the samples are often present fake positive.For eliminating the fake results，we test the samples repeatedly by different ways with the same reagent-box.Results We found the result of the samples are mostly aroused by hemolysis or feculent serum and the way of eliminating the fake result is the different way of cleaning the troughs.Conclusion We should select ideal cleaning the troughs according to different serum samples.
Key words ELISA HBsAg cleaning the troughs fake positive
酶聯免疫法檢測HBsAg具有靈敏度高、特異性強等優點而被廣泛應用，但在日常檢測HBsAg工作中常遇到陽性率高、重復性不好的現象，假陽性結果易給廣大體檢人員（HBsAg假陽性者）造成強大的精神壓力，易引起對檢測人員的投訴，同時對檢測機構易造成不良的聲譽。因此，本人針對這一現象，為使檢驗結果更加準確，采用同一種試劑盒對陽性結果通過不同的方法進行重復測定分析，結果發現:引起假陽性結果主要來源于有溶血或渾濁的血清，而消除其假陽性結果的方法主要在于不同的洗板方式。
1 材料與方法
1.1 血清標本 采靜脈血做兩對半的血清標本主要為來自我區公共場所和食品衛生行業人員的復檢標本。
1.2 試劑 由北京萬泰試劑有限公司生產的乙肝HBsAg酶聯免疫試劑盒。
1.3 方法 在按照試劑盒操作說明書操作之余，同時改變不同的溫育時間和不同的洗板方式進行重復檢測，在檢測過程中，小心吸取血清部分，盡量避免吸取到血球或其它渾濁的血清，并記錄標本的溶血或其它原因引起的混濁現象，對有懷疑的陽性結果進行重新核實并復檢兩對半。
2 結果
2.1 溫育時間對檢測結果的影響 取兩對半的血清標本450份（其中有渾濁可溶血的標本15份），分別在加入酶標物后以37℃溫育30min和37℃溫育60min，檢測HBsAg，其結果見表1。
表1 不同溫育時間檢測結果（略）
經χ 2 檢驗，χ 2 =0.04，χ 2 <χ 20.05（1） =7.88，P>0.05，說明兩種不同的溫育方法檢測HBsAg其陽性結果差異無顯著性。因此，沒有必要對其陽性結果進行核實復檢。
2.2 洗板方式對檢測結果的影響 對430份兩對半血清標本（其中65份標本有溶血現象，7份標本有白蛋白類物質存在的渾濁現象），以不同的洗板方式對HBsAg進行檢測，然后對具爭議性的陽性結果者再進行一次抽血復檢確認。具體結果見表2。對不同洗板方法陽性結果的核對:其差異全部來源于溶血的血清標本。經χ 2 檢驗，常規的洗板方法與其它三種洗板方法對檢測HBsAg結果差異有顯著性（其中方法1，χ 21 =4.21;方法2，χ 22 =5.74;方法3，χ 23 =4.78;χ 21 ，χ 22 ，χ 23 >χ 20.05（1） =3.84，P<0.05），而除常規機洗外的其他三種洗板方式差異無顯著性。
2.3 溶血或其它原因對檢測結果的影響 由于溶血等現象引起的血清渾濁的現象同樣可以引起兩對半其它結果出現假陽性或假陰性的現象，因此，對具有爭議性的HBsAg（+）者進行重新采樣（共33份），并進行兩對半檢測確認，結果HBsAg全部為陰性。
表2 不同洗板方法檢測結果（略）
注:常規洗板:每次洗板后浸泡1min，然后再洗板，機洗+振搖:每洗板一次振搖1min，然后再進行下一次洗板（在洗板機中設定），人工洗:每次洗板必須浸泡1min后，然后在吸水紙上進行拍板，機洗+人工洗:在常規洗板2次后，在吸水紙上進行用力拍板，再洗板4次
3 討論
不同的溫育時間對HBsAg檢測結果基本沒有影響，說明在30min的溫育時間內酶標物能與HBsAg結合并完全“牢固”地吸附在酶標板上，而溫育時間較長的HBsAg（+）結果相反較多（主要出現在溶血現象的標本上），這可能由于影響酶標反應的殘留物在較長時間內沉積在酶標板上， 在洗板的過程中較難被洗去，這與高菊華 ［1］ 所報道的結果不一致，這可能與其使用不同的試劑盒有關。
由檢測結果可以看出:不同的洗板方法檢測HBsAg對較“澄明”的血清而言，它們的結果是一致的，而對溶血等對引起血清渾濁的血樣來說，它們的結果相差較大，這由于影響酶標反應的殘留物雖一定程度上吸附在酶標板上，但經不同程度的拍打和振搖，可以“完全”把其洗脫，在不同的洗板方式中，經方式2為最理想的洗板方法，這可能由于更大力拍打使殘留吸附物得以更完全的洗脫。
綜上所述，為使結果更加準確，檢測的特異性更高，我們應針對血清樣本存在的具體情況（是否溶血等現象），選擇較理想的洗板方法。
參考文獻
1 高菊華，高海英.不同溫育時間的酶聯免疫法對HBsAg結果的影響.中國衛生檢驗雜志，2000，10（5）:606.
（收稿日期:2004-07-04）
作者單位:518033廣東省深圳市福田區疾病預防控制中心
（編輯劉 靜）
