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健康人及血栓前狀態患者血小板膜流動性觀察

來源:INTERNET 作者:孟春霞 賈海亞 2005-7-26

摘要: 血小板是血液的主要有效成分,其粘附性、聚集性是影響血液流變學的重要因素,而后者恰是老年人缺血性心腦血管疾病的重要發病因素。膜流動性是細胞主要的生物物理特征,血小板膜流動性異常可影響血小板的功能 [1] ,因此血小板膜流動性改變是影響缺血性心腦血管疾病發生和發展的病理生理基礎之一。測定健康人及血栓前狀......


  血小板是血液的主要有效成分,其粘附性、聚集性是影響血液流變學的重要因素,而后者恰是老年人缺血性心腦血管疾病的重要發病因素。膜流動性是細胞主要的生物物理特征,血小板膜流動性異常可影響血小板的功能 [1] ,因此血小板膜流動性改變是影響缺血性心腦血管疾病發生和發展的病理生理基礎之一。測定健康人及血栓前狀態患者血小板膜流動性的變化,重點探討我國健康人血小板膜流動性的正常參考值。

  1 資料與方法
    
  1.1 一般資料 Ⅰ組:健康人166例,男102例,女64例,年齡21~92歲,平均(54.6±17.8)歲,均為健康查體者,經常規臨床檢查和實驗室檢驗排除了神經系統疾病、高血壓、心臟病、糖尿病、血液系統疾病、高脂蛋白血癥及外周血管性疾病。Ⅱ組:原發性高血壓患者31例,男17例,女14例,年齡52~78歲,平均65.6歲。Ⅲ組:糖尿病患者25例,男15例,女10例,年齡41~68歲,平均57.7歲。Ⅳ組:高脂血癥患者27例,男18例,女9例,年齡55~66歲,平均61.0歲。
   
  以上四組在試驗前2周內均無大量飲酒及高脂飲食史,未服用影響血小板功能藥物,皆于晨6時抽取肘靜脈血。
   
  1.2 方法
   
  1.2.1 血小板懸液的制備 將肝素抗凝的新鮮血6ml于800rpm離心10min,取出上層血漿,然后加入預冷的PBS等滲緩沖液10ml稀釋,重復洗滌血小板2次后懸浮。
   
  1.2.2 膜微粘度的測定 [2]  先將熒光探劑1,6-二苯基-1,3,5己三烯(DPH,Sigma公司產品)溶于四氫呋喃液配成2mM母液,臨用前用PBS稀釋成2μM的工作液。取血小板懸液與等容量DPH工作液混勻,37℃溫育5min,然后用PBS洗滌一次,再用PBS懸浮至等體積即得DPH標記的血小板,然后將血小板濃度調整至1×10 7 個/ml。采用日本RF-540型熒光分光光度計及偏振裝置(島津公司生產)分別測定檢偏器水平和垂直位的熒光強度I 1 和I ⊥ 上,激發光和發射光波長分別為370nm和430nm,狹縫為10nm。測試系統37℃恒溫。根據公式P=I 1 -GI ⊥ I 1 -G ⊥ 計算偏振度P值,其中G為校正因子。P越小,膜流動性越大。
   
  1.3 統計學處理 采用F檢驗、Newman-Keuls檢驗進行組間比較。直線相關性方法分析年齡與膜流動性的相關性。

  2 結果
    
  2.1 膜微粘度正常參考值 Ⅰ組數據男性、女性膜流動性值比較差異無顯著性(P>0.05),各年齡組間有顯著差異。全組膜流動性與年齡呈負相關(P<0.05),老年期患者(74例)這種相關性更為顯著(P<0.01)。測得的膜流動性值范圍為0.167~0.318,利用正態分布法求得健康人血小板膜流動性的95%可信限(正常參考值范圍)為0.195~0.296,各年齡組正常參考值見表1。
   
  2.2 各組血小板膜流動性的變化 見表2。與健康人組比較,其它各組膜流動性值均顯著降低。
    
  表1 不同年齡組健康人血小板膜流動性及正常參考值(略)

  注:與2l~29歲組比較, * P<0.05, ** P<0.01, *** P<0.001;老齡各組與50~59歲組比較, △ P<0.05, △△ P<0.01, △△△ P<0.001
    
  表2 各組血小板膜流動性的變化(略)

  注:與Ⅰ組比較, * P<0.05, ** P<0.0l
    
  3 討論
    
  大量研究結果表明生物膜合適的流動性是保證生物膜正常功能的必要條件,近年膜流動性的研究主要集中在紅細胞方面,晚近對血小板膜流動性的研究逐漸引起重視。血小板膜的流動性是血小板的重要力學特征,血小板生理功能與血小板膜結構的完整性及膜磷脂雙層的流動性有關,膜流動性的改變與血小板的粘附聚集釋放功能關系密切 [1,3] 。目前測定膜流動性的方法較多,其中經典的熒光偏振法簡便易行,結果可靠,DPH則是近年應用最普遍的熒光探針 [4,5] 。目前尚缺乏國人血小板膜流動性的有關參考值,本研究健康人組隨年齡增加血小板膜流動性下降,提示血小板膜流動性存在增齡性變化,健康老年人這種變化尤為顯著。本文首次提供了我國健康人群不同年齡組血小板膜流動性的正常參考值。
   
  缺血性心腦血管疾病患者血小板膜流動性降低已得到國內外學者證實 [3,6] ,但心肌梗死及腦梗塞與血小板膜病態改變的因果關系一直有爭議。本文結果顯示血栓前狀態患者血小板膜流動性下降,此與既往國外研究結果一致 [7~9] ,膜流動性改變將引起血小板其它功能的變化,提示心肌梗死、腦梗塞前即可能存在血小板膜流動性降低,說明病態血小板參與了缺血性心腦血管病的發病過程。影響膜流動性的因素較多,本資料結果不能確定各組對象膜流動性異常的確切原因,但設法改善血小板膜流動性對于預防衰老、防治缺血性心腦血管疾病的發生將具有重要意義。
    
  參考文獻

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  4 翁維良.血液流變學研究方法及其應用.北京:人民衛生出版社,1992,24-30.
   
  5 黃賢智.熒光偏振測定法.見:陳國珍主編.熒光分析法.第二版.北京:科學出版社,1990,262-282.
   
  6 Caimi G,Montana M,Canino B,et a1.Platelet membrane fluidity and platelet membrane lipid pattern in several clinical conditions.Clinical Hemorheology,1996,16(2):177.
   
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  8 Caimi G,Montana.M,Canino B,et al.Platelet membrane fluidity,platelet membrane lipid pattern and platelet cytosolic Ca 2+ content in subjects with vascular atherosclorotic disease.Clinical Hemorheology,1994,14(3):393.
   
  9 Sang LQ,Montenay KH,Devynck MA.Alterations of platelet membrane microviscosity in essential hypertension.Clin Sci,1991,80:205.
   
  作者單位:250003山東省濟南市干部休養所門診部 


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