當前位置:Home > 醫源資料庫 > 在線期刊 > 中華醫學研究雜志 > 2005年第5卷第7期 > 前列通淤提取液對前列腺平滑肌細胞增殖與凋亡的作用

前列通淤提取液對前列腺平滑肌細胞增殖與凋亡的作用

來源:中華醫學研究雜志 作者:陳通文 鄧春華 劉建中 陳輝熔 陳和亮 王文鳳 周 2006-8-19
336*280 ads

摘要: 【摘要】 目的 研究前列通淤提取液對體外培養前列腺基質平滑肌細胞增殖與凋亡的作用。 方法 分別以1、2、10、50、100×10 -5 g/L5種不同濃度前列通淤提取液作用體外培養前列腺基質平滑肌細胞,采用MTT和TUNEL法分別測定抗增殖指數和凋亡指數。 結果 5種不同濃度前列通淤提取液作用48h后抗增殖指數分別為50。100×10 -5 g......


  【摘要】 目的  研究前列通淤提取液對體外培養前列腺基質平滑肌細胞增殖與凋亡的作用。 方法  分別以1、2、10、50、100×10 -5 g/L5種不同濃度前列通淤提取液作用體外培養前列腺基質平滑肌細胞,采用MTT和TUNEL法分別測定抗增殖指數和凋亡指數。 結果  5種不同濃度前列通淤提取液作用48h后抗增殖指數分別為50.61%、53.52%、56.92%、65.53%、72.94%,抗增殖效果隨著濃度增大而增大。100×10 -5 g/L前列通淤提取液作用24、48和72h后凋亡指數與對照組比較差異無顯著性。 結論  1~100×10 -5 g/L前列通淤提取液體外作用前列腺基質平滑肌細胞具有顯著的抗增殖作用。
    
  【關鍵詞】  前列腺;平滑肌細胞;細胞凋亡;前列通淤
      
  Effect of extracted liquid from Qianlietongyu on the proliferative or apoptosis on prostatic smooth muscle cells in vitro
     
  CHEN Tong-wen,DENG Chun-hua,LIU Jian-zhong,et al.

  Zhuhai Hospital,Guangdong Provincial Hospital of TCM,Guangdong519015,China
   
  【Abstract】 Objective To study the effect of extracted liquid fromQianlietongyu on the proliferative or apoptosis on prostatic smooth muscle cells in vitro.Methods After extracted liquid fromQianlietongyu treated the cultured prostat-ic smooth muscle cells,the antiproliferative index and apoptosis index were assessed by MTT assy and terminal de-oxynucleotidy transferase mediated dUTP nick end labling(TUNEL)respectively.Results There was a significant dose-effect relationship between the concentration of extracted liquid from Qianlietongyu and the antiproliferative in-dex on prostatic smooth muscle cells in vitro(P<0.01),but there was no significantly different of the apoptosis index between the group of extracted liquid from Qianlietongyu and the control group(P>0.05).Conclusion Extracted liquid from Qianlietongyu may show significant antiproliferative effect on prostatic smooth muscle cells in vitro,without inducing apoptosis.
   
  【Key words】 prostate;smooth muscle cells;apoptosis;extracted liquid from Qianlietongyu
      
  中藥前列通淤膠囊可顯著改善排尿和前列腺壓痛等癥狀,對前列腺疾病的治療有一定療效,但其作用機制尚不清楚 [1] 。前列腺組織包括上皮和基質(平滑肌和結締組織)細胞成分,其中基質平滑肌細胞約占40%[2] 。本實驗研究前列通淤提取液對體外培養前列腺基質平滑肌細胞增殖與凋亡的影響,旨在探討前列通淤膠囊治療前列腺疾病的細胞水平作用機制。

  1 材料與方法
    
  1.1 組織來源和實驗材料 前列腺組織取自2001年我院經恥骨上前列腺摘除術新鮮標本,病理排除前列腺癌。主要試劑:RPMI-1640培養液(含L-谷酰胺),10%胎牛血清,1%胎牛血清,膠原酶Ⅰ型0.5g/L,青鏈霉素(200U/ml),二性霉素(1μg/ml),睪酮(0.05μg/ml),潑尼松(0.05μg/ml),MTT(1g/L),二甲亞砜(DMSO),兔抗人角蛋白單抗,兔抗人Actin單抗,TUNEL試劑盒等。中藥前列通淤膠囊由珠海星光制藥廠提供,膠囊內粉末用無菌生理鹽水溶解后離心取上清液備用,預實驗確定前列通淤提取液有效濃度為(1~100)×10 -5 g/L。
   
  1.2 前列腺基質細胞的分離培養及鑒定 新鮮前列腺手術標本剪成2mm×2mm×2mm碎塊,經消化離心后,沉淀不能溶解的組織和大塊上皮細胞,再離心上清液,取沉淀細胞種入50ml培養瓶,在5%CO 2 、37℃條件下培養,每周更換培養液3次,取第5代對數生長期細胞實驗用。顯微鏡下觀察細胞形態變化,取第1、5代細胞行抗α-Actin、Cytoker-atin18免疫細胞化學染色,分別計算陽性細胞占總細胞數的百分比。
   
  1.3 MTT測定細胞抗增殖指數 實驗分7組,每組8個復孔,按細胞密度5×10 3 /cm 2 接種于96孔培養板。加入含血清培養液0.2ml,24h細胞貼壁后PBS洗2次,加入無血清培養液0.2ml,48h后細胞靜止。除去上清后加入含血清培養液0.1ml,再加入1、2、10、50、100×10 -5 g/L5種濃度的前列通淤提取液0.1ml。作用48h后,吸除培養液,加入0.2ml MTT,37℃孵育4h,加入0.5%400μl的DMSO溶解形成藍色結晶色團,振動10min。在ELX800型自動酶標儀570nm波長測定每孔內DMSO溶液的吸光度A值。抗細胞增殖指數(%)=[(對照組A值-實驗組A值)/對照組A值-空白組A值]×100%。
   
  1.4 TUNEL測定凋亡指數 實驗分前列通淤提取液和對照兩組,按細胞密度5×10 3 /cm 2 接種在24孔培養板上,每組4個復孔。加入含血清培養基1ml,24h細胞貼壁。PBS洗兩次,加入無血清培養基1ml,48h細胞靜止。除去上清后加入100×10 -5 g/L前列通淤提取液1ml,作用24、48、72h。按TUNEL試劑盒說明操作標記凋亡細胞,光鏡(×200)下計算5個隨機視野凋亡細胞數,凋亡指數(%)=(凋亡細胞數/細胞總數)×100%。
   
  1.5 統計學方法 所有數據經SPSS8.0軟件處理,兩組以上比較采用方差分析和兩兩比較的q檢驗

  2 結果
    
  2.1 培養前列腺基質細胞特征 顯微鏡下觀察細胞在24h有部分貼壁生長,12d細胞幾乎長滿需要傳代,呈典型的梭形,細胞數目增多形成細胞小結,呈現“峰與谷”的特征。免疫細胞化學染色顯示第1、5代Cytokeratin18 + 上皮細胞分別占9.3%和1.7%,α-Actin + 平滑肌細胞分別占35.7%和82.3%,表明經過5~6代后已形成了以平滑肌細胞為主的前列腺基質細胞。(圖1)
   
  2.2 MTT實驗 1、2、10、50、100×10 -5 g/L5種不同濃度前列通淤提取液抗細胞增殖指數分別為50.61%、53.52%、56.92%、65.53%和72.94%,5種不同濃度前列通淤提取液均具有不同程度的抗增殖作用(44.21%~82.62%),統計分析有顯著差異(表1)。隨著濃度增高抗增殖指數升高,呈劑量效應關系(圖2)。
    
  表1 不同濃度前列通淤提取液的前列腺平滑肌細胞抗增殖指數 (略)
    
  注: ■ 之間和 ▲ 之間比較P>0.05,其余各組間比較P<0.01
    
  2.3 TUNEL實驗 濃度為100×10 -5 g/L的前列通淤提取液作用前列腺基質平滑肌細胞24、48和72h后凋亡指數分別為1.2%、1.7%和1.8%,對照組分別為1.3%、1.5%、和1.8%,方差分析顯示各治療組間差異無顯著性。
    
  3 討論
    
  我國傳統中成藥治療前列腺疾病多有良方,但有關細胞水平作用機制方面的研究報道較少,這是治療前列腺增生藥物中中成藥的市場占有率不高的原因之一,同時也是治療前列腺的中成藥不能走向國際市場的重要原因。國外采用植物藥治療前列腺疾病在歐洲最活躍,有的國家多達90%的前列腺增生病人采用植物藥治療。植物藥治療前列腺疾病作用機制主要有以下幾方面:直接抑制前列腺的生長;抗雄激素或抗雌激素作用;降低性激素結合球蛋白的含量;改變膽固醇的代謝;干擾前列腺素E的代謝起抗炎作用等 [3] 。有關植物藥對前列腺細胞動力學變化的研究則較少。
   
  本研究發現濃度為(1~100)×10 -5 g/L的中藥前列通淤提取液體外作用培養前列腺基質平滑肌細胞,不同濃度均有顯著的抗細胞增殖作用。選擇最大的抗增殖濃度100×10 -5 g/L未發現有明顯的誘導凋亡作用。提示前列通淤提取液中存在抑制前列腺基質平滑肌細胞生長的有效成分。前列通淤膠囊中藥方劑中的某些活性成分抑制前列腺基質平滑肌的生長可能是臨床治療前列腺疾病的細胞水平機制。大量研究發現前列腺基質細胞的生長受多種細胞因子的調節,中藥前列通淤提取液調節前列腺基質平滑肌細胞的生長可能是通過調節某種或多種生長因子起作用,亦可能其活性成分本身即包含有多種生長因子,這些都值得深入研究 [4] 。

  (本文圖片見封三)(略)

  【參考文獻】
    
  1 彭淑蓮,賈玉森,陳和亮,等.前列通淤膠囊治療慢性前列腺炎臨床觀察.中國實驗方劑雜志,2000,6(4):57-59.
   
  2 陳輝熔,鄧春華,丘少鵬,等.良性前列腺增生病人前列腺基質成分含量的變化.中華男科學,2001,7(6):362-364.
   
  3 Franlin CL,James CK.Phytotherapy in treatment of benign prostatic hyperplasia:a critical review.Urology,1996,48(1):12-20.
   
  4 Walsh PC.Campbell's Urology,Volume2,7th ed,Philadelphia,W.B.Sauders Company,1998,1433.
    
  (編輯守 中)

  作者單位:519015廣東珠海,廣東省中醫院珠海醫院男科
   
       510080廣東廣州,中山大學附屬第一醫院泌尿外科

       510080廣東廣州,中山大學中山醫學院生物學教研室
   
       519015廣東珠海,廣東省珠海市拱北醫院男科


醫學百科App—醫學基礎知識學習工具


頁:
返回頂部】【打印本文】【放入收藏夾】【收藏到新浪】【發布評論



察看關于《前列通淤提取液對前列腺平滑肌細胞增殖與凋亡的作用》的討論


關閉

網站地圖 | RSS訂閱 | 圖文 | 版權說明 | 友情鏈接
Copyright © 2008 39kf.com All rights reserved. 醫源世界 版權所有
醫源世界所刊載之內容一般僅用于教育目的。您從醫源世界獲取的信息不得直接用于診斷、治療疾病或應對您的健康問題。如果您懷疑自己有健康問題,請直接咨詢您的保健醫生。醫源世界、作者、編輯都將不負任何責任和義務。
本站內容來源于網絡,轉載僅為傳播信息促進醫藥行業發展,如果我們的行為侵犯了您的權益,請及時與我們聯系我們將在收到通知后妥善處理該部分內容
聯系Email: