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薄層層析-紫外分光光度法測定香丹注射液中原兒茶醛的含量

來源:中華醫學研究雜志 作者:偶志紅徐丹丹郭薇 2006-8-19

摘要: 【摘要】 目的 建立薄層層析-紫外分光光度法測定香丹注射液中原兒茶醛的含量。方法 以原兒茶醛為對照品,展開劑為二氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸(8∶5∶0。8)分離得到原兒茶醛,采用紫外分光光度法,檢測波長281nm,測定原兒茶醛的含量。結果 原兒茶醛在0。...


    【摘要】  目的  建立薄層層析-紫外分光光度法測定香丹注射液中原兒茶醛的含量。方法  以原兒茶醛為對照品,展開劑為二氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸(8∶5∶0.8)分離得到原兒茶醛,采用紫外分光光度法,檢測波長281nm,測定原兒茶醛的含量。結果  原兒茶醛在0.55~4.95μg/ml 范圍內線性關系良好,r=0.9998。平均含量為0.174mg/ml,加樣回收率為97.3%~102.3%,RSD為1.6%。結論  實驗結果表明,薄層層析-紫外分光光度法測定香丹注射液中原兒茶醛的含量,方法操作簡便,準確度高,精密度好,可作為樣品的檢測方法。

  【關鍵詞】  香丹注射液;原兒茶醛;薄層層析-紫外分光光度法;含量測定

  Determination of protocatechuic aldehyde in injection saliae miltiorrhizae composita by TLC-UV

  OU Zhi-hong,Xu Dan-dan,GUO Wei.

  Pharmaceutical College,Shanxi Medical University,Taiyuan 030001,China

  【Abstract】  Objective  A TLC-UV method was developed to separate and determine protocatechuic aldehyde in injection saliae miltiorrhizae composita.Methods  Contrasting with protocatechuic aldehyde, the amount of protocatechuic aldehyde in injection saliae miltiorrhizae composita have been determined by TLC-UV with methylene chloride-acetic acid acetic ester-formic acid(8∶5∶0.8)as the developing solvent and the detection wavelength at 281nm.Results  The calibration carver was linear in the range of 0.55~4.95μg /ml (r=0.9998)for protocatechuic aldehyde .The average amount is 0.174mg /ml.The recoveries of protocatechuic aldehyde are between 97.3% and 102.3%,and RSD% was not more than 2.0%.Conclusion  The method is simple,rapid and reproducible for determination of protocatechuic aldehyde in injection saliae miltiorrhizae composita.

  【Key words】  injection of saliae miltiorrhizae composita;protocatechuic aldehyde;TLC-UV;content determination

    香丹注射液為棕色澄明液體,是由降香和丹參提取物配制而成,臨床用于治療心絞痛、心肌梗死等。處方中降香是豆科植物降香檀樹干和根的干燥心材,性辛,溫,能活血止血,行氣止痛。丹參為唇形科植物丹參的干燥根及根莖,性微寒味苦,具有活血化瘀,涼血消腫,清心除煩之功效。丹參的化學成分[1]為兩類,一類為脂溶性的二萜醌類,主要為丹參酮Ⅰ和丹參酮ⅡA,具有抗菌、抗炎及擴張血管作用;另一類為水溶性的酚酸類,主要為原兒茶醛,是抗心絞痛有效成分。中華人民共和國藥品衛生部藥品標準WS3-B-3289-98采用高效液相色譜法測定香丹注射液中原兒茶醛的含量[2]。本文參考有關文獻[3,4]建立了薄層層析-紫外分光光度法分離測定香丹注射液中原兒茶醛的含量,方法簡便,準確度高,精密度好,成本低廉。

  1  材料與儀器

  1.1  材料  二氯甲烷、乙酸乙酯、甲酸,均為分析純。對照品:原兒茶醛(中國藥品生物制品檢定所)。薄層層析硅膠G(青島海洋化工有限公司)化學純。水為蒸餾水。香丹注射液(10ml/支)。

  1.2  儀器  752紫外可見分光光度計(上海菁華科技儀器有限公司)。微量點樣器(5μl)。分析天平。

  2  實驗方法

  2.1  薄層層析條件的考察

  2.1.1  對照品溶液的制備  精密稱取原兒茶醛對照品1.1mg,置10ml容量瓶中,加水溶解稀釋至刻度,搖勻即得濃度為0.11mg/ml。

  2.1.2  陰性對照品溶液的制備  取降香10g加水100ml浸潤,進行水蒸汽蒸餾,收集蒸餾液約5ml,冷藏靜置24h,分去油層,收集水溶液得到陰性對照品溶液。

  2.1.3  展開條件的選擇  薄層板為0.3%CMC-Na的硅膠G板,105℃活化0.5h,置干燥器中備用。精密吸取香丹注射液10μl點于硅膠G-CMCNa薄層板上,另取原兒茶醛對照品溶液和陰性對照品溶液分別點于香丹注射液斑點兩側。以二氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸(8∶5∶0.8)為展開劑,展開約12cm。取出,晾干,濃氨水顯色,結果見圖1。

  2.2  含量測定方法的建立

  2.2.1  對照品溶液的制備  精密稱取原兒茶醛對照品1.1mg,置10ml容量瓶中,加水溶解稀釋至刻度,搖勻即得濃度為0.11mg/ml。

  2.2.2  供試品溶液的制備  精密吸取香丹注射液20μl,點于硅膠G-CMCNa(0.3%)薄層板上,另取對照品溶液10μl點于供試品斑點一側作為對照。以二氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸(8∶5∶0.8)為展開劑,展開約12cm,取出,晾干。在紫外燈(365nm)下觀察,定位。刮取與對照品斑點相應位置上的供試品斑點,精密加入5ml水溶解,過濾,即得原兒茶醛供試品溶液。

  2.2.3  檢測條件的選擇  文獻記錄原兒茶醛在281nm處吸光度最大。精密量取對照品溶液1ml置10ml的容量瓶中,加水稀釋至刻度,搖勻。以蒸餾水為空白對照在281nm左右測定吸光度,結果281nm處吸光度為最大。圖1  香丹注射液薄層層析圖 略

  2.2.4  標準曲線的制備  精密量取對照品溶液5ml置10ml的容量瓶中,加水稀釋至刻度,搖勻。分別精密量取0.1ml,0.3ml,0.5ml,0.7ml,0.9ml對照品溶液置10ml的容量瓶中,加水稀釋至刻度,搖勻。使濃度分別為0.55μg/ml,1.65μg/ml,2.75μg/ml,3.85μg/ml,4.95μg/ml。

  以蒸餾水為空白對照在281nm波長處測吸光度,以吸光度(A)為縱坐標,濃度(C)為橫坐標,進行回歸分析,回歸方程為:A=2.6×10-3+0.1015C,r=0.9998(n=5)。

    結果表明,原兒茶醛在濃度0.55~4.95μg/ml 范圍內線性關系良好。測定結果見表1。表1  標準曲線的制備 略

  2.2.5  穩定性試驗  精密吸取香丹注射液20μl,點于硅膠G-CMCNa(0.3%)薄層板上,另取對照品溶液10μl點于供試品斑點一側作為對照。以二氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸(8∶5∶0.8)為展開劑,展開約12cm,取出,晾干。在紫外燈(365nm)下觀察,定位。刮取與對照品斑點相應位置上的供試品斑點,精密加入5ml水溶解,過濾,即得原兒茶醛供試品溶液。

  刮取同一薄層板上與供試品斑點等面積的空白硅膠G-CMCNa(0.3%),精密加入5ml水溶解,過濾,取濾液作為空白對照。

  取供試品溶液和對照品溶液分別在281nm波長處測吸光度,隔30min測定一次,連續測定3h,結果在3h內吸收度穩定。測定結果見表2。

  2.2.6  精密度試驗  取同一供試液連續測定6次,結果表明精密度良好。測定結果見表3。表2  穩定性試驗結果 略表3  精密度試驗結果 略

  2.2.7  含量測定  分別精密吸取香丹注射液20μl兩份,點于硅膠G-CMCNa(0.3%)薄層板上,另取對照品溶液10μl點于供試品斑點一側作為對照。以二氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸(8∶5∶0.8)為展開劑,展開約12cm,取出,晾干。在紫外燈(365nm)下觀察,定位。刮取與對照品斑點相應位置上的供試品斑點,精密加入5ml水溶解,過濾,即得原兒茶醛供試品溶液Ⅰ和Ⅱ。

  刮取同一薄層板上與供試品斑點等面積的空白硅膠G-CMCNa(0.3%),精密加入5ml水溶解,過濾,取濾液作為空白對照。

  取樣品在281nm波長處測吸光度,由標準曲線計算供試品中原兒茶醛的含量。測定結果見表4表4  含量測定結果 略

  2.2.8  加樣回收率試驗  精密吸取香丹注射液5ml,置于10ml量瓶中,分別加入對照品1.0mg、1.5mg、2.1mg,加水至刻度,搖勻,按“含量測定”項下操作,測定,計算回收率,結果見表5表5  加樣回收率試驗結果 略

  3  實驗結果

  原兒茶醛在0.55~4.95μg/ml 范圍內線性關系良好,r=0.9998。平均含量為0.174mg/ml,加樣回收率為97.3%~102.3%,RSD為1.61%。

  4  討論

  (1)點樣斑點直徑應控制在2~3mm,有較好的分離效果。(2)原兒茶醛為丹參水溶性酚酸類成分,在展開劑中加入少量甲酸,抑制酸的解離。文獻中使用的展開劑為苯-乙酸乙酯-甲酸(8:5:0.8),但是苯有毒性,本實驗用與苯有相似極性二氯甲烷代替亦得到了較好的分離效果。(3)本實驗過程中還使用過甲醇-水-冰醋酸(22:78:0.5),氯仿-甲醇-水(8:1:1)。但分離效果都不好,采用二氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸(8:5:0.8)作為展開劑有較好分離效果。(4)降香揮發油水飽和溶液在本實驗條件下不干擾原兒茶醛的含量測定。

  5  結論

  實驗結果表明,薄層層析-紫外分光光度法測定香丹注射液中原兒茶醛的含量,方法操作簡便,準確度高,精密度好,可作為樣品的檢測方法。

  【參考文獻】

  1  劉燕,謝培德,王寶琴.丹參及其制劑質量的評價方法.中國中藥雜志,1990,15(3):31-34.

  2  中華人民共和國藥品衛生部藥品標準WS3-B-3289-98.

  3  蔡梅,季一兵,駱雪芳,等.高效液相色譜法測定香丹注射液中丹參素和原兒茶醛的含量.海峽藥學,2004,16(3):54-55.

  4  王振魯,于立佐.薄層-紫外分光光度法測定復方丹參膏中原兒茶醛的含量.山東醫藥工業,1999,18(6):7-8.

  作者單位: 030001 山西太原,山西醫科大學藥學院

  (編輯:秋  實)


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