當前位置:Home > 醫源資料庫 > 在線期刊 > 中華醫學研究雜志 > 2006年第6卷第1期 > Decorin因子對人胃癌細胞及其表達的MG7蛋白的作用

Decorin因子對人胃癌細胞及其表達的MG7蛋白的作用

來源:中華醫學研究雜志 作者:趙斌燕,齊峰 2006-8-19
336*280 ads

摘要: 【摘要】 目的 研究decorin因子對人胃癌細胞BGC-823的抑制作用,以及對胃癌細胞特異表達的MG7蛋白的影響。方法 腫瘤細胞用含不同劑量(0、1、3、6μl)decorin的細胞培養液培養,應用MTT測定法來測定生長抑制率,電鏡技術來觀察細胞凋亡情況,免疫組化技術來檢測細胞內MG7蛋白含量。結果 decorin對胃癌細胞具有生長抑制作......


  【摘要】  目的  研究decorin因子對人胃癌細胞BGC-823的抑制作用,以及對胃癌細胞特異表達的MG7蛋白的影響。方法  腫瘤細胞用含不同劑量(0、1、3、6μl)decorin的細胞培養液培養,應用MTT測定法來測定生長抑制率,電鏡技術來觀察細胞凋亡情況,免疫組化技術來檢測細胞內MG7蛋白含量。結果  decorin對胃癌細胞具有生長抑制作用,并呈現時間和劑量依賴性(方差分析,P<0.05)。電鏡下可觀察到凋亡細胞,免疫組化發現細胞內MG7的含量在處理前后有明顯變化。結論  decorin因子抑制人類胃癌細胞生長,誘導其產生凋亡,有望作為一種新的凋亡誘導劑用于胃癌的治療,并且該因子的作用與細胞內MG7含量有密切關系。

  【關鍵詞】  decorin;胃癌細胞;MG7蛋白
   
  Influences of decorin on the BGC-823 cell and MG7 protein

  ZHAO Bin-yan,QI Feng.

  2003 Grade,Postgraduate Class,Qinghai Medical College,Xining 810001,China

  【Abstract】  Objective  To exp1ore the effect of decorin on the  BGC-823 cell and MG7 protein.Methods  The growth inhibition of cells induced by various concentrations of decorin in different time course was analyzed by using MTT assay. The cell’s apoptosis alterations were evaluated by transmission electron microscopy (TEM),and quantity of MG7 was evaluated by cytochemical staining.Results  The inhibition of proliferation on the cells was observed.The inhibitory effect was dose-dependent. Apoptotic cells were observed under transmission electron microscope. The different quantities of MG7 protein in cells were observed by cytochemical staining.Conclusion  Decorin inhibits proliferation,induces apoptosis of human gastric cancer cells,and the effects have close relation to the quantities of MG7 protein in cells.

  【Key words】  decorin;gastric cancer cells(BGC-823);MG7 protein

  Decorin是一種主要存在于結締組織中與膠原纖維相關的蛋白多糖(proteoglycan,PG),有多種生物活性,可以調節和控制組織形態發生、細胞分化、運動、增殖及膠原纖維形成等過程,對防止組織和器官纖維化的發生有重要意義。已有研究表明,Decorin作為一種生物制劑可誘導肝癌細胞凋亡[1]。此外,大量資料表明,decorin能抑制多種組織來源的細胞生長[2]。MG7作為一種胃癌相關抗原由于其特異性最強,在胃癌組織中高表達[3~4],近年來逐漸受到大家的重視,也成為了既有效又經濟的胃癌篩檢的好方法。因此,我們選擇人類胃癌細胞(BGC-823)來觀察decorin對他們的生長抑制及促凋亡作用,以及對于胃癌細胞所表達的MG7的影響,從而為decorin抗腫瘤機制的進一步研究和胃癌的化學治療或是化學輔助治療的臨床應用提供依據。

  1  材料與方法

  1.1  材料  胰酶、MTT購自北京夏斯生物技術有限公司,新生小牛血清購自杭州四季青生物工程材料公司,RPMI1640購自GIBCO,PBS 、ABC試劑盒購自博士德生物公司,胃癌細胞(BGC-823)由軍事醫學科學院惠贈。MG7抗體由第四軍醫大學提供。Decorin因子由山西醫科大學微生物免疫實驗室提供。

  1.2  方法

  1.2.1  細胞培養  BGC-823細胞置于含5%CO2 37℃的培養箱中培養,以含10%小牛血清的RPMI1640作為其培養基,于100ml培養瓶中進行培養,2~3d傳代,用0.1%的PBS洗2遍,0.25%的胰酶消化,分裝。

  1.2.2  細胞干預  將對數生長期的BGC-823細胞計數后,調整細胞密度為1×104/L,接種到96孔培養板,每孔200μl,每組5孔,細胞貼壁后每孔分別加入濃度為15μg/ml的decorin(1μl、3μl、6μl)繼續培養24h、48h、72h,以培養液為對照組。MTT(5G/L)20μl,37℃再培養4h,棄上清加DMSO 200μl,震蕩10min,于酶標儀490nm波長測定吸光度,記錄數據。實驗重復3次。腫瘤細胞的抑制率(%)=(1-實驗組A值/陰性對照組A值)×100%。

  1.2.3  形態學觀察  培養狀態下,直接用倒置顯微鏡觀察細胞的生長狀況,形態改變及凋亡小體形成,細胞爬片培養經decorin作用后,0.1%PBS洗滌,95%乙醇固定,常規HE染色,觀察細胞形態與核染色質的變化。

  1.2.4  MG7的測定  細胞培養同上,將生長旺盛的胃癌細胞用胰酶消化,制成密度為1×105/L的懸液,接種于24孔培養板中,孔內預置蓋玻片,細胞貼壁后,分別加入5μl、15μl、30μl decorin,每孔設3復孔,以加常規培養液的孔做對照,分別培養24h、48h、72h,吸去上清液,95%乙醇固定15~20min,待免疫組化染色。收集上清液用于MG7的測定。

  1.3  統計學處理  用方差分析,q檢驗經SPSS統計分析軟件進行數據的統計學處理,顯著性取P<0.05。

  2  結果

  2.1  細胞增生抑制率  decorin因子能有效抑制體外培養的BGC-823細胞生長,其抑制率隨時間延長和濃度升高而升高見表1,呈時間效應和劑量效應關系。

  表1  decorin因子對BGC-823細胞的生長抑制率劑量(略)  

  2.2  細胞HE染色形態觀察  光鏡下未處理組細胞形態呈多角形、圓形、細胞體積大,邊緣不清,多形性明顯,胞質較豐富飽滿而透亮;核大小不一,可見核分裂、雙核及核仁;細胞生長緊密甚至呈堆疊生長(圖1A),decorin處理組細胞形態變化明顯,由多角形為主變為形態一致、以梭形為主,胞質豐富透亮,可見部分圓形漂浮的細胞,其胞質內見許多顆粒;大部分細胞體積小,貼壁緊密,分散存在,細胞境界清楚;細胞核明顯變小(圖1B)。

  2.3  細胞化學染色觀察  MG7陽性的細胞主要為細胞質和核膜著色,呈棕黃色細顆粒狀,少部分細胞有細胞核和細胞質同時著色。處理前的腫瘤細胞,MG7的表達水平較高(圖2A),而處理后,可以發現,MG7表達水平明顯下降,并出現細胞形態的改變(圖2B)。

  3  討論

  凋亡異常在腫瘤發生發展中具有重要作用,逃避凋亡機制的調控在腫瘤細胞對常規化療藥物耐藥中起關鍵作用。隨著凋亡研究的深入,人們致力于開發新的藥物以選擇性誘導腫瘤細胞凋亡[5]。

  目前腫瘤仍是嚴重威脅人類生命的主要疾病之一,其發病機制復雜,影響因素多[6]。臨床上,許多患者在確診時已喪失了手術機會,而化療和放療的效果不佳、毒副作用較大。因此,如何早期發現腫瘤,同時尋找一種高效低毒的藥物進行化療或是輔助治療晚期腫瘤,就是許多學者研究的方向。有研究表明decorin因子,在肝的纖維化和腎臟的病理變化中都起著重要的作用[7],越來越多的資料表明由于decorin在體內可以表現出多種生物活性因而能抑制多種細胞增殖,使轉化的細胞和腫瘤細胞靜止[8],這就為腫瘤治療提供了新的藥理學線索。Decorin作為一種小分子、富含亮氨酸的蛋白聚糖分子,在體內參與構成調控細胞增殖的負反饋環路。目前國外的研究表明,decorin對多種腫瘤細胞有抑制作用,其機制是decorin和細胞膜上的EGF受體結合,啟動了MAP激酶/p21等的信號轉導途徑[9]。

  本實驗中,我們通過MTT法發現decorin因子具有明顯的抑制胃癌細胞生長的作用,并且存在量-效關系。通過電鏡又觀察到decorin因子對他們存在明顯的促凋亡作用。通過細胞化學染色,我們發現decorin因子對胃癌細胞內的MG7蛋白具有明顯的抑制作用,此蛋白的含量可能與decorin因子的作用密切相關。因此通過測病人血清中的MG7含量從而判定decorin因子對于胃癌患者的療效可能成為一種簡便易行的臨床檢驗方法。

  (本文圖片見封三)(略)

  【參考文獻】

  1  趙素蓮,王桂琴,田樹華.Decorin對肝癌細胞株凋亡作用的研究.腫瘤防治雜志,2002,9(3):235-238.

  2  Santra M,Skorski T,Calabretta B,et al.De novo decorin gene expression suppresses the malignant phenotype in human colon cancer cells.Proc Natl Acad Sci U S A,1995,92(15):7016-7020.

  3  Meng FP,Ding J,Yu ZC,et al.Development and preliminary identification of the attenuated Salmonella typhimurium vaccine expressing the gastric cancer MG7-Ag mimotope.Xibao Yu Fenzi Mianyixue Zazhi,2002,18:138-143.

  4  Guo CC,Ding J,Yu ZC,et al.Development of oral DNA vaccine based on MG7-Ag mimotope of gastric cancer. Zhonghua Zhongliu Zazhi,2002,24:110-113.

  5  Kasibhatla S,Tseng B. Why target apoptosis in cancer treatment. Mol Cancer Theory,2003,2:573-580.

  6  Guo J,Shen ZX,Tan SY,et al.Expression of MDM2,P53 and P14ARF in human colon cancer. Shijie Huaren Xiaohua Zazhi,2002,10:540-543.

  7  Hogemann B,Edel G,Schwarz K,et al. Expression of biglycan,decorin and proteoglycan-100/CSF-1 in normal and  fibrotic human liver. Pathol Res  Practice,1997,193:747-751.

  8  Santra M,Skorski T,Calabretta B,et al.De novo decorin gene expression suppresses the malignant  phenotype in human colon cancer cells.Proc Natl Acad Sci USA,1995,92:7016-7020.

  9  Moscatello DK,Santra M,Mann DM.Decorin suppresses tumor cell growth by activating the epidermal growth factor receptor. J Clin Invest,1998,101(2):406-412.

  (編輯:守  中)

  作者單位:810001 青海西寧,青海醫學院2003級研究生班

       030006 山西太原,武警山西總隊醫院骨二科


 


醫學百科App—醫學基礎知識學習工具


頁:
返回頂部】【打印本文】【放入收藏夾】【收藏到新浪】【發布評論



察看關于《Decorin因子對人胃癌細胞及其表達的MG7蛋白的作用》的討論


關閉

網站地圖 | RSS訂閱 | 圖文 | 版權說明 | 友情鏈接
Copyright © 2008 39kf.com All rights reserved. 醫源世界 版權所有
醫源世界所刊載之內容一般僅用于教育目的。您從醫源世界獲取的信息不得直接用于診斷、治療疾病或應對您的健康問題。如果您懷疑自己有健康問題,請直接咨詢您的保健醫生。醫源世界、作者、編輯都將不負任何責任和義務。
本站內容來源于網絡,轉載僅為傳播信息促進醫藥行業發展,如果我們的行為侵犯了您的權益,請及時與我們聯系我們將在收到通知后妥善處理該部分內容
聯系Email: