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克林霉素誘導實驗在陽性球菌藥敏實驗中的應用

來源:中華醫學研究雜志 作者:林立中,王曉飛,楊翠云,夏先考 2006-8-19

摘要: 【摘要】目的 探討陽性球菌中紅霉素誘導克林霉素耐藥性的發生情況,合理指導臨床用藥。方法 MIC法檢測某院579株陽性球菌對克林霉素和紅霉素的耐藥情況。雙紙片法檢測可誘導克林霉素耐藥。結果 金黃色葡萄球菌、凝固酶陰性球菌及β溶血鏈球菌對紅霉素和克林霉素同時耐藥率分別占76。...


  【摘要】目的 探討陽性球菌中紅霉素誘導克林霉素耐藥性的發生情況,合理指導臨床用藥。方法   MIC法檢測某院579株陽性球菌對克林霉素和紅霉素的耐藥情況;雙紙片法檢測可誘導克林霉素耐藥。結果   金黃色葡萄球菌、凝固酶陰性球菌及β溶血鏈球菌對紅霉素和克林霉素同時耐藥率分別占76.5%、50.8%、48.0%。在紅霉素耐藥而克林霉素敏感的菌株中,D實驗陽性分別占65.0%、41.0%、34.0%。在紅霉素敏感株中未見克林霉素誘導性耐藥。結論   臨床微生物實驗室應加強可誘導克林霉素耐藥性的檢測,指導臨床有效合理的使用抗生素。
     
  【關鍵詞】革蘭陽性球菌;紅霉素;克林霉素;D實驗
   
  The amplication of clisdamycin induction test in clinical microbiology susceptiability laboratories

  LIN Li-zhong,WANG Xiao-fei,YANG Cui-yun,et al.The First Peoples Hospital of Changde City,Hunan 415003,China

  【Abstract】 Objective   To investigate the resistance of erthromycin and clidamycin in Gram-positive coccus and help to reasonably use clindamycin. Methods   Use of MIC to detect 578 isolates randomly collected from January to September in our hospital, double antimicrobial agents detect the clidamycin induce test.Results   Co-resistance to erythromycin and clindamycin accounted for 76.5%,50.8%,48.0% in Staphylococcus aureus,coagulase-negative coccus and beta-hemolylic streptococcus.Among the 129 eryRcliS isolates,the rate of inducible resistance to clindamycin (D-test positive) was 65.0%,41.0%,34.0% respectivelly.For all the eryScliS isolates,clisdamycin induce test are negative.Conclusion   The detection of inducible clindamycin resistance must be stressed in clinical microbiology laboratory to provide good support for rational antibiotic therapy.

  【Key words】Gram-positive coccus;erythromycin;clindamycin;D-test

  大環內酯類抗生素作用于細菌核糖體50S大亞基,抑制細菌蛋白質合成,從而導致細菌死亡。靶位點的改變是葡萄球菌對大環內酯類、林可霉素類、鏈陽菌素B等抗生素獲得性耐藥的主要機制,并對MLSB(大環內酯類、林可霉素類、鏈陽菌素B等抗生素)抗生素表現為交叉耐藥[1,2]。MLSB耐藥分為固有耐藥和誘導耐藥。若誘導耐藥則常規藥敏實驗表現為紅霉素耐藥而克林霉素敏感,用雙紙片法進行D實驗時可見克林霉素抑菌圈靠近紅霉素一側出現彎曲的“D”形狀,盡管在缺乏誘導劑時細菌表現對克林霉素的敏感,但臨床用克林霉素治療無效。其耐藥機制可歸結為由msrA基因編碼的泵出機制,核糖體可誘導變異,核糖體結構變異[3]。本實驗通過雙紙片法檢測可誘導克林霉素耐藥的發生情況,提示可誘導克林霉素耐藥實驗的必要性,現將實驗結果報告如下。

  1 材料

  1.1 細菌來源  

  收集某院2005年1~9月分離的陽性球菌579株(其中金黃色葡萄球菌272株,凝固酶陰性球菌132株,β溶血鏈球菌175株)。

  1.2 抗菌藥物紙片  

  紅霉素、克林霉素購于杭州天和微生物試劑有限公司。Mic法所用微生物生化、藥敏卡購于湖南天地人生物試劑有限公司。

  1.3 培養基  

  Mueller-Hinton(M-H)瓊脂培養基購于上海博塞科技發展有限公司。

  1.4 質控菌株  

  金黃色葡萄球菌ATCC25932、金黃色葡萄球菌ATCCBAA——977(陽性對照),金黃色葡萄球菌ATCCBAA-976(陰性對照)。

  2  方法

  2.1  利用MIC測定法規[4]  

  采用獲衛生部批準的湖南天地人公司生產的生化藥敏實驗卡進行。

  2.2  雙紙片擴散法[5,6]  

  據2004年NCCLS推薦在MH瓊脂平板上,分別貼紅霉素(15μg/片)和克林霉素(2μg/片)紙片。兩種紙片距離分別選用15mm、26mm,35℃培養16~18h。用常規法取2紙片邊緣距離,若靠近紅霉素紙片處克林霉素紙片抑菌圈縮小或呈“D”形狀,則顯示為誘導型耐藥。

  2.3 統計學方法  

  利用SAS8.2軟件對實驗結果進行χ2檢驗

  3 結果

  見表1。對克林霉素未進行“D”實驗耐藥率與“D”實驗后合計耐藥率進行χ2檢驗,P<0.05,差異有顯著性。表1   紅霉素、克林霉素藥敏結果及D試驗統計分布(略)注:ESCLS 紅霉素、克林霉素均敏感;ERCLR 紅霉素、克林霉素均耐藥;ERCLS 紅霉素耐藥、克林霉素敏感

    紙片間距分別為15mm和26mm時誘導克林霉素耐藥的發生情況分布見表2。表2   兩紙片間距誘導克林霉素耐藥的發生情況分布(略)

  在15mm和26mm時,陽性檢出率經χ2檢驗,P>0.05,D實驗結果差異無顯著性。

  4  討論

  本實驗結果顯示金黃色葡萄球菌可誘導克林霉素耐藥的發生率為65%,較凝固酶陰性球菌(41%)和β溶血鏈球菌(34%)高,由579株陽性球菌對克林霉素耐藥性的分布情況可知,紅霉素敏感株中未出現克林霉素誘導耐藥,而紅霉素耐藥株中,克林霉素耐藥株也較多,且固有耐藥株占大部分,誘導耐藥株也有相當比例。總體耐藥性與固有耐藥性之間的差異有顯著性意義,故有進行“D”實驗的必要性。紙片擴散法測定時,抑菌圈結果于兩紙片間距在15mm時較26mm略明顯;但差異無顯著性;D實驗被用于臨床實驗室檢測紅霉素對克林霉素的誘導耐藥性,簡單易行。能很好的避免不恰當的使用克林霉素導致治療的失敗。目前微量稀釋法和機器法藥敏尚不能檢出此種誘導耐藥,如不做實驗,則不能正確報告。所以臨床微生物實驗室應加強克林霉素誘導耐藥性的檢測,以保證克林霉素耐藥性檢出的準確性,指導臨床醫生合理使用抗生素。

  【參考文獻】

  1 趙先穎,徐元宏,江曉平.醫院感染葡萄球菌菌種變遷與耐藥近況.中國微生態學雜志,2003,1:40-43.

  2 李智山.葡萄球菌醫院感染及耐藥譜分析.中華醫院感染學雜志,2004,14(6):691-693.

  3 沈定霞,羅燕平,徐雅萍,等.葡萄球菌對紅霉素和克林霉素的誘導耐藥性研究.中華檢驗醫學雜志,2005,18(4):400-403.

  4 NCCLS.Performance standards for antimicrobial susceptibility testing(S).14th informational supplement M100-S14,2004,24:40-47.

  5 應春妹.雙紙片法檢測克林霉素誘導耐藥性.中華抗感染化療雜志,2005,3:171-173.

  6 周小梅.葡萄球菌中誘導型克林霉素耐藥觀察分析.深圳中西醫結合雜志,2005,1(3):132-135.

  作者單位: 415003 湖南常德,常德市第一人民醫院檢驗科
 


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