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江西省萍鄉市HIV流行狀況分析

來源:《中華醫學研究雜志》 作者:曾建國, 易志強, 張春之,鄧蘭, 舒紅萍, 劉繼連, 2008-7-4

摘要: 【摘要】 目的 對江西省萍鄉市艾滋病感染者進行HIV基因亞型分析,了解我市HIV流行情況、亞型種類、毒株來源及其變異等,為我市預防控制決策提供技術資料。方法 傳統流行病學與分子流行病學相結合,對我市8例HIV感染者進行流行病相關因素分析和基因序列、系統進化分析。結果 我市HIV感染人群中流行的毒株主要為HI......


【摘要】  目的 對江西省萍鄉市艾滋病感染者進行HIV基因亞型分析,了解我市HIV流行情況、亞型種類、毒株來源及其變異等,為我市預防控制決策提供技術資料。方法 傳統流行病學與分子流行病學相結合,對我市8例HIV感染者進行流行病相關因素分析和基因序列、系統進化分析。結果 我市HIV感染人群中流行的毒株主要為HIV-1 CRF01-AE。結論 目前我市HIV-1感染者中流行毒株為 CRF01-AE 、主要在吸毒人群中傳播,HIV流行已從吸毒人群向性亂人群蔓延,我市應加強對吸毒人群和性亂人群的行為干預。

【關鍵詞】  HIV/AIDS; 流行; 分析

    人類免疫缺陷病毒(HIV)基因具有高度的變異性,使其在傳播過程中產生出許多相對獨立的基因序列特性的亞型,并在全球范圍的流行蔓延過程中形成一定的地區性分布特點。根據HIV-1基因組中變異性較大、同時也被研究得最多的膜蛋白基因(ENV)和核心蛋白(GAG)基因序列的同源性,目前流行于全球的HIV-1分為三組,M組(主要組)、O組(外圍組)和N組,M組內又可分為A~J 10個亞型,各亞型間的基因離散率是20%~35%[1,2]。HIV-1的分子流行病學研究不僅可追蹤傳染源研究毒株的變異規律,而且為我國疫苗及HIV-1診斷試劑的研制提供基礎資料。

    我市自1996年在打工回家人員中發現首例HIV-1感染者以來,相繼在吸毒者、臨床病人、無償獻血等各種人群中發現了HIV感染者。而其中主要的傳播途徑為靜脈吸毒共用注射器。從2000年開始,我市HIV感染在吸毒人群中呈局部爆發流行趨勢。為掌握我市HIV-1感染人群流行傳播的特點,監測和確定HIV-1在某一流行區的基因變異及新亞型的出現,分析其變異性和地區分布特點,追蹤傳染源和發展趨勢,為政府部門制定相應的預防控制措施提供依據。我們將我市送省CDC部分HIV-1感染人群進行了基因亞型分析,現將結果報告如下。

    1  材料與方法

    1.1  流行病學調查  對HIV-1感染者進行分子流行病相關因素調查,主要采取問卷調查并結合個人深入訪談。

    1.2  樣品收集和處理  對患者進行流行病學調查后,取無菌試管并編號,抽取患者靜脈血5~10ml,去除針頭加到含有0.15%EDTA抗凝劑的試管中,立即混勻,然后提取核酸(主要參照QIAGEN公司DNA Blood Mini Kit操作步驟)。

    1.3  PCR擴增  選擇HIV病毒基因序列作為研究對象,使用套式PCR的方法,擴增HIV-1 env C2-V3區的基因序列,對得到的基因序列進行亞型分析和系統進化分析。套式PCR方法所使用的引物見表1。以ED5/ED12為外側擴增引物,進行第一輪PCR,反應條件為:94℃ 2min,55℃ 1min,72℃ 2min,1 個循環;94℃ 30s,55℃ 30s,72℃ 1min30s,30個循環;72℃延伸10min, 4℃保溫。取第一輪產物5 μl,以E7/E8作為內側引物進行第二輪擴增,反應條件如下:94℃1min,55℃ 1min,72℃ 1min30s,1 個循環;94℃ 30s,55℃30s,72℃1min,共35個循環,72℃延伸10min,4℃保溫。表1  PCR引物序列表

    1.4  PCR產物純化  對PCR產物進行純化,使用Qiagen Gel Extraction試劑盒,按使用說明操作。

    1.5  基因序列測定和分析  使用美國應用生物系統公司(ABI)的377型DNA全自動序列分析儀和熒光標記末端終止物循環測序試劑盒,進行基因序列測定,測得的序列用ABI公司的SEPED軟件進行編輯校正,序列的排列,比較和同源性等分析使用GCG軟件包。并使用MEGA(version 2.1)進行系統樹分析。

    2  結果

    2.1  流行病相關因素調查  見表2。表2  萍鄉市HIV-1基因分型樣品流行病相關因素一般情況和亞型
    本次調查的HIV感染者8例,男7例,女1例,確認時間分別為1996、1999、2000、2001、2002年,年齡最小的為19歲,最大的42歲。靜脈吸毒感染7例,性接觸感染1例。在靜脈吸毒感染者中有5例共用注射器伙伴為1~3人,其余2例在20人以上,全為本市人,提示在吸毒人群中還有大量的感染者存在。

    2.2  亞型結果分析  見表3。表3  萍鄉樣品與CRF01-AE參考株間的基因距離 從樣品中提取核酸,經套式PCR擴增env基因C2~V3區,最終得到了8份樣品的基因序列,將測序結果進行編輯整理后,根據測得的C2~V3區及其相鄰的大約340個核苷酸序列,應用Pileup和Pretty 程序進行有關排列和比較,與HIV-1 M組各個亞型國際參考株的基因序列進行比較, 8份樣品與CRF01-AE.TH.93TH253相近,亞型分類屬于CRF01-AE,與CRF01-AE泰國代表株(CRF01-AE.TH.90.CM240)平均基因距離為9.47±2.71; CRF01-AE亞型樣品中Jix0201、Jix0202、Jix0210、Jix0212、Jix0213、Jix0219、Jix0226、Jix9801聚在一起,有很近的基因距離,組內的基因距離僅有2.93±1.40(n=13),表明這些感染者具有相近的流行病學背景,來自同一傳染源,這與這些感染者共用注射器的流調資料正好吻合。

    3  討論                                                                  

    我市以CRF01-AE流行毒株為主,從本研究中基因距離的結果來看, CRF01-AE亞型毒株間的基因距離為2.93±1.40(n=8),根據HIV-1毒株基因平均每年以0.5%~1%的速率變異計算[1,2],可以認為,CRF01-AE亞型毒株在我市內局部暴發流行時間大約有2年半左右,從與國際其他地區和我國流行的重組毒株比較結果看,我市CRF01-AE亞型毒株與泰國CRF01-AE亞型毒株相近,這表明流行于我市的CRF01-AE亞型毒株與泰國流行的CRF01-AE亞型毒株有著密切的關系。HIV-1 CRF01-AE毒株1989年最先在泰國發現,主要在性傳播人群中流行擴散,隨后經有靜脈吸毒妓女和嫖客造成在吸毒人群中廣泛傳播,改變了以往B亞型感染為主的流行格局[3,4]。近些年來經過販毒通道向金三角及其周邊地區如中國云南、廣東、廣西等地擴散漫延,并在靜脈吸毒和性亂人群中流傳[5,6] 。JIX9801,1997年在廣西檢出,后返回萍鄉,在當地與多名男性(包括吸毒者)有過性關系,感染了不少人,并由此在萍鄉和南昌靜脈吸毒人員和有關人員中傳播。但從基因距離看,其余7例CRF01-AE亞型與JIX9801的基因距離,在靜脈吸毒人員7例中最大的為18.28,最小的為8.9;性接觸感染者2例中,最大的為6.76,最小的為5.71,(與其他CRF01-AE亞型基因距離均在9.03以上),表明萍鄉市性接觸感染者與JIX9801有關。而靜脈吸毒人員與JIX9801的基因距離相對遠一點,是否因經性-靜脈吸毒經血傳播或是最先感染的靜脈吸毒人員個體差異造成毒株的特殊的變異,有待進一步探討。    

    綜合上述分析結果,我市HIV-1人群中流行的毒株為CRF01-AE,其他 CRF-BC B(Bˊ)、C三種,在我市還未發現,并也在性傳播人群中漫延,另外重組亞型毒株CRF-BC已進入我省,這將給我市艾滋病的防治帶來新的挑戰,因此,應加強對吸毒人群和性亂人群的行為干預。

【參考文獻】
  1 Weniger BG,Yutaka Takebe,Ou CY,et al.The molecular epidemiology of HIV in Asia.AIDS,1994,8(supp12):1.

2 Janssons W,Fransen K,Loussert A,et al.Genetic and phylogenetic analysis of env subtype G and H in central Africa.AIDS Res Hum Retroviruses,1994,10:877.

3 Kalish ML, Baldwin A,Raktham S,et al. The evolving molecular epidemiology of HIV-1 envelope subtypes in IDU in Bangkok, Thailand; implications for HIV vaccine trials.AIDS,1995,9:851.

4 Nerukar VR. HIV type I subtype E in commercial sex worker and IDU in southern Vietnam. AIDS Res Hum Retroviruses, 1996, 9:841.

5 馮鐵建,邵一鳴,李良成,等.深圳地區HIV-1流行毒株的env基因序列測定和亞型分析.中華傳染病雜志,1998,16(4):202-205.

6 陳杰,蘇玲,梁紹伶,等.廣西壯族自治區HIV-1流行毒株的基因序列測定和亞型分析.病毒學報,1998,14(3):240-244.

7 邢輝,潘品良,蘇玲,等.1996~1998年中國流行的E亞型艾滋病病毒1弄毒株的分子流行性學研究.中國性病艾滋病防治雜志,2002,8(4):200-203.


作者單位:1 337000 江西萍鄉,萍鄉市疾病預防控制中心(Δ通訊作者)2 江西南昌,江西省疾病預防控制中心3 江西萍鄉,萍鄉市婦幼保健院


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