摘要: 【摘要】 目的 探討環氧化酶-2（COX-2）和血管內皮細胞生長因子（VEGF）在乳腺癌組織中的表達及其表達之間的關系。方法 S-P免疫組織化學方法檢測60例乳腺癌石蠟包埋組織中COX-2和VEGF的表達，分析其表達之間的關系及其與臨床病理參數的關系。結果 乳腺癌組織中COX-2陽性表達率為81。7%（49/60），VEGF陽性表達率為86。...
【摘要】 目的 探討環氧化酶-2（COX-2）和血管內皮細胞生長因子（VEGF）在乳腺癌組織中的表達及其表達之間的關系。方法 S-P免疫組織化學方法檢測60例乳腺癌石蠟包埋組織中COX-2和VEGF的表達，分析其表達之間的關系及其與臨床病理參數的關系。結果 乳腺癌組織中COX-2陽性表達率為81.7%（49/60），VEGF陽性表達率為86.7%（52/60）。在淋巴結無轉移組COX-2和VEGF表達明顯低于有轉移組COX-2的表達（P<0.05)。VEGF在COX-2陽性表達組中的陽性率（95.9%）明顯高于陰性組（45.5%）（χ2=19.79，P=0.000）。結論 乳腺癌組織中COX-2和VEGF的高表達可能有利于淋巴結轉移；乳腺癌組織中COX-2的表達可能有促進腫瘤血管生成的作用。
【關鍵詞】 乳腺腫瘤；環氧化酶-2；血管內皮生長因子；免疫組織化學
Clincal significance of expression of cyclooxygenase-2 and vascular endothelial growth factor in human breast carcinoma
GUI Shuang-yuan,LIU Yun-feng.Department of Oncology,Yongzhou People’s Hospital,Hunan 425006,China
【Abstract】 Objective To study the significance of expression of cyclooxygenase-2(COX-2)and vascular endothelial growth factor(VEGF)in breast cancer(BC)and its correlation.Methods Paraffin imbedding tissues from 60 cases with BC were detected for expression of COX-2 and VEGF by immunohistochemistry,the relationship of its expression with clinical pathological parameters were analyzed.Results The positive expression rate of COX-2 was 81.7% in BC,and VEGF was 86.7%.The expression of COX-2 and VEGF in BC with lymph node metastasis were significantly higher than that in BC without lymph node metastasis(all P<0.05).The expression of VEGF in COX-2 positive expression BC tissues was significantly higher than that in COX-2 negative expression BC tissues(χ2=19.79,P=0.000).Conclusion High expression of COX-2 and VEGF in BC tissue indicated the lymph node metastasis might occur.COX-2 might up regulate the expression of VEGF in BC.
【Key words】 breast neoplasms;cyclooxygenase-2;VEGF;immunohistochemistry
環氧化酶（COX）是花生四烯酸轉化為前列腺素的限速酶，有COX-1和COX-2兩種。COX-1存在于許多正常組織中，而COX-2是一種誘生型酶，正常生理狀態時不易檢測到，當受到各種細胞因子、生長因子及腫瘤啟動因子等的刺激后，COX-2的表達水平可迅速升高。近年來國內有關COX-2在乳腺癌中的表達已有報道，但有關COX-2與腫瘤的新生血管生成的關系罕見。本研究旨在觀察與探討COX-2在乳腺癌中的表達及其與腫瘤血管生成因子VEGF的關系。
1 資料與方法
1.1 一般資料 收集我院2004年1月~2006年4月行乳腺癌改良根治術或根治術患者共60例。均為女性，年齡28~75歲，平均（48.14±9.8）歲，其中≤50歲34例，>50歲26例。術前均未化療，術后均經病理證實。病理類型：浸潤性導管癌24例，單純癌32例，髓樣癌3例，浸潤性小葉癌1例。按乳腺癌國際TNM分期：Ⅰ期9例，Ⅱ期３８例，Ⅲ期13例。淋巴結轉移情況：腋窩淋巴結陰性23例，腋窩淋巴結陽性37例。
1.2 試劑與方法 兔抗人COX-2多克隆抗體和VEGF單克隆抗體免疫組化SP試劑盒及DAB顯色劑均購自北京中山生物技術有限公司。取腫瘤標本分別在4%福爾馬林固定液、Carnoy固定液中4℃過夜固定，不同梯度的乙醇脫水，二甲苯透明，石蠟包埋，4~5μm厚度連續切片，進行HE染色觀察及免疫組織化學染色。一抗的工作濃度為1：100，操作分別按說明書操作。已知陽性片為陽性對照，PBS代替一抗作為陰性對照。
1.3 結果判定 為減少主觀片面性，每例分別由兩人各自閱片，然后核對所得結果，獲得共識。COX-2的免疫組化染色以細胞漿及核膜出現棕黃色顆粒者為陽性細胞（圖1），VEGF的免疫組化染色以細胞漿出現棕黃色顆粒為陽性細胞（圖2）。以陽性細胞數為基礎，陽性細胞數10%以上為陽性表達，陽性細胞數＜10%判斷為陰性。
1.4 統計學處理 本組資料采用SPSS10.0統計軟件進行統計學分析。率的比較采用χ2檢驗。
2 結果
2.1 COX-2和VEGF蛋白的表達 60例乳腺癌組織中COX-2陽性表達者49例，陽性表達率為81.7%；VEGF陽性表達者52例，陽性表達率為86.7%。
2.2 COX-2表達和VEGF表達與臨床病理指標關系 對COX-2和VEGF表達與臨床病理指標的關系進行分析，在淋巴結無轉移組COX-2和VEGF表達明顯低于有轉移組COX-2和VEGF的表達（見表1），差異有顯著性（P<0.05),而COX-2和VEGF的表達在不同年齡段、腫瘤大小、ER、PR狀況、臨床分期之間的差異無顯著性（P>0.05)。表1 COX-2表達和VEGF表達與臨床病理指標關系注：*表示COX-2不同的值
2.3 COX-2表達與VEGF表達的關系 49例COX-2陽性表達患者VEGF陽性表達者47例，陽性率為95.9%，11例COX-2陰性表達患者VEGF陽性表達者5例，陽性率為45.5%，VEGF在COX-2陽性表達組中的陽性率明顯高于陰性組，差異有顯著性（χ2=19.79,P=0.000)。
3 討論
近幾年來，國外許多的研究發現COX-2在乳腺癌的發生、發展中有重要的作用，主要表現在以下幾個方面：COX-2及其產物前列腺素刺激細胞增殖，同時抑制免疫；COX-2過度表達促進腫瘤新生血管生成；COX-2過度表達增加腫瘤細胞侵襲力，抑制腫瘤細胞凋亡；COX-2介導的細胞突變［1，2］。流行病學證實非甾體類抗炎藥物可以通過抑制COX-2的表達而發揮防治腫瘤的作用［3］。因此研究COX-2在乳腺癌中表達有著重要的臨床意義。
本研究結果顯示在淋巴結無轉移組COX-2表達明顯低于有轉移組COX-2的表達，與Surowiak等［4］、龐達［5］和胡春宏等［6］結果一致，說明COX-2的高表達與乳腺癌淋巴結轉移有關，COX-2具有促進乳腺癌淋巴轉移的作用，提示乳腺癌組織中COX-2的高表達可能是預后不良的指標。胡春宏等［6］研究發現COX-2的表達還與臨床分期有關，與年齡、腫瘤大小、ER、PR狀況無關，Ristimaki等［7］研究發現COX-2的表達水平與腫瘤大小、組織學分級、雌激素受體陰性表達等相關。本研究COX-2的表達在不同年齡段、腫瘤大小、ER、PR狀況、臨床分期之間差異無顯著性，可能與本組樣本少有關。本組VEGF的表達在淋巴結轉移組明顯高于無淋巴結轉移者，由此認為VEGF促進乳腺腫瘤新生血管形成的同時也促進癌浸潤和淋巴道的轉移。這可能是由于豐富的血管不僅增加了腫瘤細胞進入血液循環的機會，也增加了腫瘤細胞侵入鄰近的與毛細血管伴行的淋巴管或通過靜脈-淋巴管吻合處進入淋巴管的幾率而促進淋巴道轉移過程。
本研究結果顯示VEGF在COX-2陽性表達組中的陽性率明顯高于陰性組，進一步證實COX-2具有促進腫瘤新生血管生成的作用。Tsujii等［8］研究發現，體外轉染COX-2基因的人結腸癌細胞株在過度表達COX-2的同時，促血管生成因子VEGF、bFGF、PDGF、內皮素-1等均明顯上調。而COX-2抑制劑NS398可明顯抑制這些促血管生長因子的表達，動物實驗也證實選擇性COX-2抑制劑Celecoxib能抑制小鼠移植瘤新生血管形成［9］。腫瘤組織中血管生成誘導因子的大量表達是誘導腫瘤血管生成的主要原因之一，迄今已知的各種血管生成誘導因子中，VEGF已被證實是作用最強、并在腫瘤和正常組織中起著最重要作用的促血管生成因子之一［9］。乳腺腫瘤組織中COX-2與VEGF表達的密切相關性提示乳腺腫瘤中COX-2可能通過促使VEGF表達，從而促進腫瘤新生血管生成，進而促進腫瘤生長和轉移，抑制COX-2活性對乳腺癌的防治可望具有較為廣闊應用前景。
（本文圖片見封三）
【參考文獻】
1 Singh-Ranger G,Mokbel K.The role of cyclooxygenase-2(COX-2)in breast cancer,and implications of COX-2 inhibition.Eur J Surg Oncol,2002,28(7):729-737.
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3 Harris R E,Kasbari S,Farrar WB.Prospective study of nonsteroidal anti-inflammatory drugs and breast cancer.Oncol Rep,1999,6(1):71-73.
4 Surowiak P,Materna V,Matkowski R.Relationship between the expression of cyclooxygenase 2 and MDR1/P2glycop rotein in invasive breast cancers and their prognostic significance.Breast Cancer Res,2005,7(5):862-870.
5 龐達，趙憲琪，薛英威.乳腺癌組織中環氧化酶-2mRNA的表達及其意義.中華腫瘤雜志，2002，24（6）：567-569.
6 胡春宏，文芳，鄧超，等.環氧化酶-2在乳腺癌中高表達的臨床意義.中國腫瘤，2006，15（12）：870-872.
7 Ristimaki A,Sivula A,Lundin J,et al.Prognostic significance of elevated cyclooxygenase-2 expression in breast cancer.Cancer Res,2002,62(3):632-635.
8 Tsujii M,Kawano S,Tsuji S,et al.Cyclooxygenase regulates angiogenesis induced by colon cancer cells.Cell,1998,93(5):705-716.
9 Masferrer JL,Leahy KM,Koki AT,et al.Antiangiogenic and antitumor activities of Cyclooxygenase-2 inhibitor.Cancer Res,2000,60(5):1306-1311.
作者單位：425006 湖南永州，永州市人民醫院腫瘤科
