當前位置:首頁 > 醫源資料庫 > 在線期刊 > 中華醫學研究雜志 > 2007年第7卷第8期 > 血清cccDNA與病毒復制及乙肝病變活動的關系

血清cccDNA與病毒復制及乙肝病變活動的關系

來源:《中華醫學研究雜志》 作者:李立志,呂其軍,魏成敏,郭少愚,黃 黎 2008-7-4

摘要: 【摘要】 目的 評價乙型肝炎病毒性肝炎患者血清 cccDNA 的臨床檢測價值。 方法 分別以分子信標PCR技術和實時熒光定量PCR技術檢測58例急性乙型肝炎、87例慢性乙型肝炎、37例乙肝肝硬化和26例原發性肝癌的血清cccDNA與HBV-DNA,同時檢測血清HBeAg和ALT。 結果 cccDNA 分別與血清HBeAg(χ2=9。05)、血清HBV-D......


【摘要】  目的 評價乙型肝炎病毒性肝炎患者血清 cccDNA 的臨床檢測價值。 方法 分別以分子信標PCR技術和實時熒光定量PCR技術檢測58例急性乙型肝炎、87例慢性乙型肝炎、37例乙肝肝硬化和26例原發性肝癌的血清cccDNA與HBV-DNA,同時檢測血清HBeAg和ALT。 結果 cccDNA 分別與血清HBeAg(χ2=9.2,P<0.05)、血清HBV-DNA升高(χ2=31.88,P<0.05)及血清ALT異常有關(χ2=13.21,P<0.05)。 結論 血清cccDNA 可能是乙肝病毒在患者體內大量復制并導致肝實質損傷的標志物之一。

【關鍵詞】  肝炎病毒;乙型;cccDNA;血清學;谷丙轉氨酶

  既往認為細胞外乙肝病毒DNA是一種松弛環狀的雙鏈DNA(relaxed circular DNA,rcDNA)分子,唯在感染的肝細胞核內存在共價閉合環狀DNA(covalently closed circular DNA,cccDNA),是病毒持續感染久治不愈的原因[1~4]。雖然外周淋巴細胞存在HBV-DNA,然而外周血中cccDNA并不確定[1]。血清cccDNA與乙肝病毒感染臨床表現的關系尚不十分清楚。我們檢測了205例乙肝病毒感染臨床患者血清cccDNA,現將有關資料報告如下。
   
  1  材料與方法

   
  1.1  標本來源  205例不同乙肝病毒感染肝病患者血清標本均來自我院2001年10月~2004年4月住院及門診病人,男176例,女29例;年    齡20~68歲。急性乙型肝炎、慢性乙型肝炎、乙肝肝硬化和原發性肝癌各55、87、37、26例。診斷符合2000年第十次全國傳染病與寄生蟲學會和肝病學會聯合修訂的病毒性肝炎防治方案。
   
  1.2  檢測方法  根據cccDNA結構的特點,參照文獻[2,3]。在HBV基因組DNA缺口的上下游設計一對引物,并在負鏈開口的下游設計熒光分子信標探針。以PE9700基因擴增儀與DAS620微量熒光檢測儀檢測。取室溫靜置分離不超過6h新鮮血清冷凍保存。以50μl待檢血清入0.5μl離心管內與等量處理液混勻100℃煮沸15min,12000轉/min離心5min上清液作為擴增模板。擴增條件為:94℃3min, 94℃30s,55℃40s,72℃45s,38循環后72℃延伸3min。
   
  1.3  統計學分析  組間差異用卡方(χ2)檢驗
   
  2  檢測結果
   
  2.1  血清cccDNA與肝功能血清生化指標的關系  149例血清cccDNA陰性HBsAg陽性患者ALT正常者30例,56例血清cccDNA陽性患者ALT全部升高,差異有顯著性(χ2=13.21,P<0.01)。
   
  2.2  血清cccDNA與HBV感染血清免疫學指標的關系  205例HBV感染者,cccDNA 陽性組HBeAg陽性率(54/56,96.4%),顯著高于cccDNA陰性組(28/149,18.8%)(χ2=9.20,P<0.01)。
   
  2.3  血清cccDNA與血清HBV-DNA的關系  205例    HBV感染患者,血清HBV-DNA 陽性145例(70.7%),cccDNA陽性56例(27.3%)。血清cccDNA陽性HBV-DNA水平均在1.0x103copies/ml以上,而HBV-DNA正常者血清cccDNA均為陰性(χ2=31.88,P<0.01)。
   
  3  討論
       
  cccDNA是病毒基因組RNA轉錄的模板,是HBV復制的突出標志[2,4]。cccDNA主要存在于宿主細胞核中,是目前評價抗病毒療效的“金標準”[1~5]。血液中cccDNA水平遠遠低于組織中 cccDNA水平[5],檢測較為困難。根據cccDNA結構的特點,在基因組DNA缺口的上下游各設計一對引物,并在負鏈開口的下游根據核酸堿基配對原則和熒光共振能量轉移現象設計熒光分子信標探針,能準確檢測血液中 cccDNA ,而非基因組DNA。結果初步顯示血清cccDNA陽性患者HBeAg陽性率高,HBV-DNA 更是幾乎無一例外全部升高,提示cccDNA可能與病毒復制有關;在HBV感染相關病例中,初步分析發現血清 ccc DNA與血清ALT異常有關,提示血清cccDNA 與肝病活動有關。值得進一步擴大臨床觀察。

【參考文獻】
    1 Kock J, Theilmann L, Galle P,et al.Hepatitis B virus nucleic acids associated with peripheral blood mononuclear cells do not originate from replicating virus. Hepatology, 1996,70:4567-4575.

  2 He ML, Wu J, Chen Y, et al.A new and sensitive method for the quantification of HBVcccDNA by real-time PCR.Biochem Biophys Res Commun,2002,295:1102-7.

  3 Chen Y , Sze J, He ML. HBVcccDNA in patients’ sera as an indicator for HBV reactivation and an early signal of liver damage. World J Gastroenterol, 2004,1(10):82-85.

  4 趙可開,繆曉輝,徐文勝.乙型肝炎病毒cccDNA檢測的方法與臨床意義.中華肝臟病雜志,2005,13(4):315-317.

  5 TuttlemanJS,Pourcel C,Summers J. Formation of the pool of covalently closed circular DNA in hepadna virus infected cells.Cell,1986,47:451-460.


作者單位:257034 山東東營,濱洲醫學院附屬勝利油田中心醫院


醫學百科App—醫學基礎知識學習工具


頁:
返回頂部】【打印本文】【放入收藏夾】【收藏到新浪】【發布評論



察看關于《血清cccDNA與病毒復制及乙肝病變活動的關系》的討論


關閉

網站地圖 | RSS訂閱 | 圖文 | 版權說明 | 友情鏈接
Copyright © 2008 39kf.com All rights reserved. 醫源世界 版權所有
醫源世界所刊載之內容一般僅用于教育目的。您從醫源世界獲取的信息不得直接用于診斷、治療疾病或應對您的健康問題。如果您懷疑自己有健康問題,請直接咨詢您的保健醫生。醫源世界、作者、編輯都將不負任何責任和義務。
本站內容來源于網絡,轉載僅為傳播信息促進醫藥行業發展,如果我們的行為侵犯了您的權益,請及時與我們聯系我們將在收到通知后妥善處理該部分內容