當前位置:首頁 > 醫源資料庫 > 在線期刊 > 中華醫學研究雜志 > 2007年第7卷第10期 > 中老年結直腸腺瘤癌變細胞免疫組化及增殖活性研究

中老年結直腸腺瘤癌變細胞免疫組化及增殖活性研究

來源:《中華醫學研究雜志》 作者:張品南 2008-7-4

摘要: 【摘要】 目的 探討β-catenin、P53和增殖細胞核抗原(PCNA)在結直腸腺瘤癌變中的可能作用。方法 以免疫組織化學方法檢測77例結直腸腺瘤(CRA)及癌變組織中β-catenin、P53蛋白及PCNA的表達情況。結果 CRA隨上皮異型增生程度的提高及癌變的出現,β-catenin異常表達逐漸增高(P0。伴中、重度上皮異型增生的CRA......


【摘要】  目的 探討β-catenin、P53和增殖細胞核抗原(PCNA)在結直腸腺瘤癌變中的可能作用。方法 以免疫組織化學方法檢測77例結直腸腺瘤(CRA)及癌變組織中β-catenin、P53蛋白及PCNA的表達情況。結果 CRA隨上皮異型增生程度的提高及癌變的出現,β-catenin異常表達逐漸增高(P<0.01)。伴中、重度上皮異型增生的CRA和CRA癌變組織中,β-catenin核表達陽性率明顯高于上皮輕度異型增生的CRA(P<0.01)。CRA伴輕度異型增生和CRA伴中、重度異型增生及CRA癌變3組的P53蛋白和PCNA表達依次增高,其陽性率分別為10.3%、43.8%、75.0%和17.2%、62.5%、87.5%。在β-catenin核表達陽性者中,其PCNA的強陽性表達率明顯高于β-catenin核表達陰性者(69.7%和36.4%,P<0.05);在P53蛋白表達陽性者中,其PCNA的強陽性表達率明顯高于P53表達陰性者(72.4%和37.5%,P<0.05)。在CRA癌變組中,有50%可見β-catenin和P53同時表達。結論 β-catenin、P53和PCNA在CRA癌變轉化過程中可能發揮了重要作用。

【關鍵詞】  結直腸腫瘤 P53蛋白 β-catenin 增殖細胞核抗原 免疫組織化學

    Study of immunohistochemistry and celluler proliferation activity on carcinogenesis of colorectal adenoma with malignant transformation

    ZHANG  Pin-nan, LU He-lian ,WANG Zhong-quan,et al.Wenzhou Third Peple’s Hospital, Wenzhou  Zhejiang 325000,China

    【Abstract】  Objective  Research was done on the possible roles of β-catenin , P53 and proliferating cell nuclear antigen (PCNA ) in the carcinogenesis of colorectal adenoma (CRA). Methods  β-catenin and P53 and PCNA expression were studied with immunohistochemical stain in 77 specimens of CRA together with mild epithelial dysplasia (CRA-MD) , CRA with moderate/severe epithelial dysplasia (CRA-D/SD) and CRA with cancerous changes(CRA-C).Results  The percentage of abnomal expression of β-catenin increased during the transition from CRA-MD to CRA-D/SD to CRA-C(P<0.01).The nuclear expression of β-catenin in  CRA-D/SD and CRA-C were all significantly higher than that in CRA-MD expression of P53 and PCNA were increased  from CRA-MD to CRA-D/SD to CRA-C, with the positive rates in these three groups of 10.3%,43.8%,75.0% for P53 and 17.2%,62.5%,87.5% for PCNA ,respectively. 69.7% of cases with positive nuclear β-catenin expression showed strong PCNA positivity which was much higher than the 36.4% of cases without nuclear β-catenin expression (P<0.05).The percentage of strong PCNA  expression in the P53 positive cases was significant higher than that in cases with negative P53 expression (72.4%vs37.5%,P<0.05). Nuclear β-catenin and p53 co-expression rates in CRA-C reached 50%.Conclusion  β-catenin, P53 and PCNA may play important roles in the carcinogenesis of colorectal adenoma.

    【Key words】  colorectal neoplasms ; P53 protein; β-catenin ;proliferating cell nuclear antigen; immunohistochemisty.

    結直腸腺瘤(CAR)是一種具有癌變潛能的良性病變[1]。Zhang等[2]用流式細胞術,定量研究了CRA癌變過程中rasP21、P53表達情況,發現CRA 由上皮不典型增生到癌變過程中,rasP21和P53蛋白表達量均呈明顯遞增趨勢。為進一步探討CRA癌變機理,我們采用病理形態學與免疫組織化學相結合的方法,檢測了77例管狀、絨毛狀CRA及其癌變組織中β-catenin、P53和PCNA表達情況。

    1  材料與方法

    1.1  標本來源  收集我院和樂清第三人民醫院1995年1月~2007年1月間中、老年人結直腺瘤癌變的活檢和手術標本77例,按照《全國大腸癌病理研究統一規范》[3]之標準進行腺瘤分類、異型增生分級和腺瘤癌變的診斷。77例結直腸腺瘤癌變病例中男42例,女35例,年齡45~88歲,平均58.9歲。病變發生在結腸32例,直腸45例。腫瘤直徑< 1cm者37例,1~2cm者22例,>2cm者18例。病史在12個月內62例,12個月以上15例。管狀腺瘤26例,絨毛狀腺瘤24例,管狀絨毛狀腺瘤22例;所有腺瘤癌變標本均伴有輕、中、重度異型增生,本組將異型增生分為兩類:重度(Ⅲ級)和輕度(Ⅰ級或Ⅱ級)異型增生。另選10例正常結直腸黏膜組織作為對照組。

    1.2  方法  所有標本均經中性甲醛液固定,石蠟包埋后行4μm連續切片,除常規HE染色外均同時采用En vosion 法免疫組織化學染色標記,觀察β-catenin、P53、PCNA的表達情況。所有單抗與多抗免疫組化試劑盒均購自福州邁新生物技術開發公司。實驗步驟按試劑盒說明書進行,3種一抗稀釋度均為1:100。采用En vosion法對全部病例及對照組正常黏膜進行免疫組化染色,染色前用微波爐進行抗原修復。以乳腺癌組織切片作陽性對照,以PBS替代一抗作為陰性對照。

    1.3  結果判定  (1)β-catenin陽性反應限于細胞膜,而胞漿和胞核無著色者視為陰性;若細胞核或細胞漿出現棕黃色著色則視為β-catenin陽性。(2)P53蛋白及PCNA均為細胞核表達,呈棕黃色顆粒狀,無陽性反應細胞為(-);陽性細胞數占1%~25%者為(+);陽性細胞數占26.5%~50%者為(++);陽性細胞占51%~75%為(+++);陽性細胞>75%為強陽性。

    1.4  統計學處理  將實驗數據輸入計算機,以POMS統計軟件作統計學處理。

    2  結果

    2.1  β-catenin的表達  10例正常大腸黏膜均可見細胞膜呈棕黃色染色,但細胞核及細胞漿未見著色。29例CRA伴輕度不典型增生組中,11例細胞漿陽性,3例細胞核陽性,3例細胞漿及細胞核共同表達;32例CRA伴中、重度上皮不典型增生組織中,25例細胞漿陽性,20例細胞核陽性,15例細胞漿及細胞核共同表達;16例CRA癌變組中,細胞漿均為陽性表達,10例細胞漿及細胞核共同表達。在CRA及其癌變中,部分病例出現細胞漿和細胞核陽性著色,細胞漿和細胞核共同著色者,細胞膜著色減輕。CRA腺上皮從不典型增生到癌變過程中,β-catenin在細胞漿表達陽性率以及在細胞漿和細胞核共同表達的陽性率逐漸遞增(χ2=14.73,P<0.01)。中、重度不典型增生組和CRA癌變組中β-catenin核表達陽性率均明顯高于上皮輕度不典型增生組(χ2=20.08,P<0.01)。

    2.2  P53的表達  10例正常大腸黏膜上皮細胞均未見P53陽性表達。16例CRA癌變組織中,有12例(75.0%)呈陽性表達,其中8例(50.0%)為強陽性表達(圖1);32例CRA伴中、重度異型增生的組織中,14例呈陽性表達,占43.8%,僅2例(6.3%)呈陽性表達;39例上皮輕度異型增生的CRA中,僅3例呈弱陽性表達,且僅限于極個別腺體,占10.3%。結果顯示,CRA隨上皮異型增生程度的加重到癌變的出現,P53表達明顯遞增(χ2=19.22,P<0.05)。

    2.3  PCNA的表達  10例正常結直腸黏膜上皮出現弱陽性表達,陽性細胞位于黏膜腺體基底部,表面分化成熟上皮無陽性表達。隨CRA上皮異型增生程度的遞增直至癌變,PCNA表達強度也隨著明顯遞增(圖2)(χ2=23.44,P<0.01)。

    2.4  β-catenin表達與P53和PCNA表達的關系  CRA伴輕度異型增生組未見β-catenin和P53同時表達,而CRA伴中重度異型增生組二者同時表達者占28.1%(9/32),CRA癌變組則達到50.0%(8/16;χ2=16.15,P<0.05)。在β-catenin核表達陽性組織中,有69.7%PCNA呈強陽性表達(圖2),明顯高于β-catenin表達陰性者(χ2=8.60,P<0.05),提示β-catenin在細胞核的積聚中多出現在一些增殖活性高的細胞。在P53蛋白表達陽性者中,PCNA均為陽性表達,而且其強陽性者明顯高于P53蛋白陰性者(χ2=23.44,P<0.05)。此外,β-catenin、P53蛋白及PCNA表達與患者性別、年齡、腫瘤發生部位、大小以及病史無關。

    3  討論

    β-catenin作為細胞間粘連的重要組成成分,在正常細胞質游離水平較低。它的主要作用adherin,形成E-cadherin-β-catenin功能復合體,調節細胞粘附系統,影響細胞粘附性、運動性,進而影響組織結構和形態變化。同時,β-catenin也參與細胞信號傳導途徑[4]。CRA基因(APC)是腫瘤抑癌基因,它的突變是大腸腺瘤→腺癌序列中較為普遍的基因差異,常發生在癌變早期階段[5]。最近研究發現,細胞內β-catenin水平受APC蛋白調節,APC上基因突變可導致β-catenin聚集并異位于核上,β-catenin分布的檢測可作為評價大腸腫瘤早期發展階段臨床-病理特征潛在惡性的標準[6]。除APC基因突變,β-catenin基因本身突變也可以導致β-catenin聚集。有學者認為,β-catenin基因突變可能是大腸腫瘤形成的早期事件[7]。本研究結果顯示,CRA隨腺上皮異型增生程度的加重和癌變的出現,β-catenin細胞質陽性表達率和細胞質、細胞核同時表達的比率依次升高,而細胞核的陽性率在CRA中、重度異型增生和癌變兩組間未見明顯差異。提示在CRA癌變過程中,首先出現β-catenin在細胞質的異位積聚,而后才出現在細胞核的異位積聚。β-catenin異位積聚在CRA癌變過程中發揮著重要作用,其在細胞核和細胞質的異位聚集可能反映了CRA癌變過程中APC突變或β-catenin基因的突變。

    抑癌基因P53失活表現為突變型P53蛋白的過度表達。本研究發現,CRA由上皮輕度異型增生→中、重度異型增生→癌變,P53蛋白表達陽性率也隨著遞增,分別為10.3%、43.8%和75.0%,表明P53蛋白過度表達與CRA惡性傾向密切相關,提示P53的突變在CRA癌變過程中可能發揮了一定作用。Damalas等[8]研究了在大腸癌形成過程中β-catenin過度表達對P53的影響,發現β-catenin過度表達通過干擾P53降解而導致其聚集。但也有學者提出了不同觀點,認為β-catenin與P53在大腸腫瘤中表達無明顯相關性。本研究結果顯示,雖然CRA伴輕度異型增生組部分病例可見β-catenin異位核表達或P53蛋白的表達,但未見二者同時呈陽性的情況,而CRA伴中、重度異型增生組二者同時表達者28.1%,CRA癌變組則達到50.0%。表明β-catenin和P53共同表達在CRA癌變中可能發揮著重要作用。PCNA是真核細胞DNA聚合酶8的輔助蛋白,在DNA復制中起重要作用。一般認為,旺盛的增殖是細胞癌變的基礎。本研究結果顯示,隨著CRA上皮異型增生程度加重和癌變,細胞核PCNA強陽性表達率同步遞增,表明CRA癌變過程中細胞增殖活性逐漸提高。同時還發現,PCNA的強陽性表達與P53蛋白表達及β-catenin細胞核異位積聚平行。以上結果表明,β-catenin核異位、P53基因突變及PCNA強陽性表達在CRA癌變中可能發揮了重要作用。

    (本文圖片見封三)

【參考文獻】
  1 王慧萍,姚洪田,丁偉,等.結直腸腺瘤及癌變組織中增殖基因和細胞凋亡基因的表達.中華病理學雜志,2000,29(6):405-408.

2 Zhang XH, Wu WX, Lu HT, et al . celluar DNA, ras P21and P53 expression in the carcinogenesis of colorectal adenomatous ployps . Analyt Quant Cytol Histol,1999,21(3):449-453.

3 史景泉,陳意生.現代外科病理學.北京:人民軍醫出版社,1998,155-157.

4 Munne A ,Fabre M , Marinoso ML, et al .Nuclear β-catenin in colorectal tumors :to freeze or not freeze ? colon cancer team at IMAS. J Histochem Cytochem , 1999, 47 (26):1089-1094.

5 Powell SM , Zilz N,Beazer-Barclay Y, et al . APC mutations occur early during colorectal tumorigenesis. Nature , 1992 , 359(4):235-237.

6 Shimizu M, Yoshimi N ,Shimizu S ,et al .The relationship between the histopathological atypia and expression of β-catenin in colonic neoplasms resected by endoscopy; comparison with that of P53 protein Nippon Shokakibyo Gakkai Zasshi, 1999,96:1050-1056.

7 Samwitz WS, Powers MD, Spirio LN, et al . β-catenin mutations are more frequent in small colorectal adenomas than in larger adenomas and invasive carcinomas. Cancer Res, 1999,59:1442-1444.

8 Damalas A, Benzeev A , Simcha I, et al .Excess β-catenin Promotes accumulation of transcriptionally active P53. EMBO J ,1999 ,18:3054-3063.


作者單位:325000 浙江溫州,溫州市第三人民醫院


醫學百科App—醫學基礎知識學習工具


頁:
返回頂部】【打印本文】【放入收藏夾】【收藏到新浪】【發布評論



察看關于《中老年結直腸腺瘤癌變細胞免疫組化及增殖活性研究》的討論


關閉

網站地圖 | RSS訂閱 | 圖文 | 版權說明 | 友情鏈接
Copyright © 2008 39kf.com All rights reserved. 醫源世界 版權所有
醫源世界所刊載之內容一般僅用于教育目的。您從醫源世界獲取的信息不得直接用于診斷、治療疾病或應對您的健康問題。如果您懷疑自己有健康問題,請直接咨詢您的保健醫生。醫源世界、作者、編輯都將不負任何責任和義務。
本站內容來源于網絡,轉載僅為傳播信息促進醫藥行業發展,如果我們的行為侵犯了您的權益,請及時與我們聯系我們將在收到通知后妥善處理該部分內容