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滋陰補腎丸對青木香減毒作用的初步研究

來源:《中華醫學研究雜志》 作者: 2009-8-24
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摘要: 【摘要】 目的 本試驗通過研究滋陰補腎丸對青木香中馬兜鈴酸A含量的影響,以初步探討青木香的解毒問題。方法 青木香與滋陰補腎丸共煎后用RP-HPLC法測定馬兜鈴酸A的吸收值,觀測其含量的變化情況。結果 加入滋陰補腎丸后,青木香中馬兜鈴酸A的含量明顯降低。結論 滋陰補腎丸可顯著降低青木香中馬兜鈴酸A的含量。...


【摘要】  目的 本試驗通過研究滋陰補腎丸對青木香中馬兜鈴酸A含量的影響,以初步探討青木香的解毒問題。方法 青木香與滋陰補腎丸共煎后用RP-HPLC法測定馬兜鈴酸A的吸收值,觀測其含量的變化情況。結果 加入滋陰補腎丸后,青木香中馬兜鈴酸A的含量明顯降低。結論 滋陰補腎丸可顯著降低青木香中馬兜鈴酸A的含量。

【關鍵詞】  滋陰補腎丸;青木香;馬兜鈴酸A;減毒

Preliminary study on reducing poison effect of Ziyin Bushen Pill on slender Dutchmanspipe root

    MAO Xiao-chun, SUN Yun, FENG Gao-ping.Institute for Biochemical Drug Control of Zhangye City, Gansu  734000,China

    【Abstract】  Objective  To study the reducing poison effect of Ziyin Bushen Pill on slender Dutchmanspipe root.Methods  The absorption value and its change of descresept A was determined by HPLC after slender Dutchmanspipe root and Ziyin Bushen Pill were decocted together. Results  The content of descresept A decreased obviously as Ziyin Bushen Pill was added. Conclusion  Ziyin Bushen Pill can markedly decrease the content of descresept A in slender Dutchmanspipe root.

    【Key words】  Ziyin Bushen Pill; slender Dutchmanspipe root; descresept A; attenuation

    青木香的藥用標準雖然已被取消,但其中所含主要毒性成分馬兜鈴酸的解毒一直是許多專家致力解決的問題。國內有1例服用“木通”導致腎損害,停用腎透析后連服中藥六味地黃丸加減使病情穩定,腎功能恢復正常的報道[1]。為了深入研究滋陰補腎丸對青木香的減毒作用及機理,我們設計了以下實驗。

    1  儀器與試藥

    1.1  實驗儀器  日立L6000型高效液相色譜系統,包括L-4200H UV-VIS Detector D-2500型色譜數據處理儀。MA240D電子分析天平,上海第二天平儀器廠。GQ7OE-5型紅外快速干燥箱,上海市吳淞五金廠。數顯恒溫水浴鍋,金壇市大地自動化儀器廠。

    1.2  藥物  青木香,為馬兜鈴科植物馬兜鈴Aristolochia  debilis Sieb. et Zucc.的干燥根,購自中國生物制品檢定所,批號:919-9001。滋陰補腎丸(濃縮丸),甘肅省河西制藥有限公司,批號:060601。

    1.3  試劑  馬兜鈴酸A對照品(aristolochic acid A,以下簡稱AA-I),中國藥品生物制品檢定所,批號110746-200406。甲醇、乙腈為色譜純,山東省禹王實業總公司禹王化工廠。無水乙醇、冰醋酸為分析醇,中國安徽醫藥公司。水為純化水,符合國家飲用水標準。

    2  色譜條件

    色譜柱:依利特Hypersil C18(4.6mm×250mm),柱號:E:1417177。流速:1ml/min。柱溫:室溫。檢測波長:250nm。進樣量:10μl。流動相:乙腈-(水+冰醋酸)=48:52,其中,水:冰醋酸=62.5: 1。理論塔板數不低于2000。

    3  試驗方法與結果

    3.1  標準溶液的制備  稱取AA-I對照品7mg,置于50ml量瓶中,加無水乙醇溶解,并稀釋至刻度,搖勻,即得濃度為0.14mg/ml的對照品儲備液,作為對照品儲備液。精密量取對照品儲備液2.00ml,于10 ml量瓶中,用無水乙醇定容至刻度,搖勻,即得濃度為0.028mg/ml的AA-I對照品溶液,作為對照品溶液。

    3.2  供試液的制備

    3.2.1  青木香樣品溶液的制備  精密稱取青木香0.6g,置于200ml燒杯中,加120ml水,煎煮30min,過濾,收集濾液,殘渣加80ml水,煎煮30min,過濾,收集濾液,合并2次濾液,置于水浴上,濃縮至干。用適量的無水乙醇溶解并完全轉移至10ml的量瓶中,加無水乙醇至刻度,搖勻。放入冰箱冷藏,靜置過夜。抽取上清液過濾,棄去初濾液,收集續濾液,放入1ml塑料離心管中,作為供試液1。

    3.2.2  青木香與滋陰補腎丸供試液的制備  分別取青木香樣品、滋陰補腎丸粉末少許,各精密稱取0.6g置于200ml燒杯中,混合兩種藥物,加入120ml水,按3.2.1項下制備青木香樣品溶液的方法進行操作,其制備液作為供試液2。                         

    3.3  AA-I的定性分析  分別吸取供試液1和對照品溶液,注入液相色譜儀,按2項下的色譜條件,測繪其色譜圖。色譜圖見圖1。

    由圖1可以看出,A(對照品溶液)、B(供試液1)中峰1的保留時間一致(tRA=7.78min,tRB=7.80min),說明峰1是AA-I。圖1  青木香樣品與馬兜鈴酸A對照品的HPLC色譜圖

    Fig.1  The  typical  HPLC  Aristolochia  debilis  and  Aristolochia  achidA  of  sample

    A.馬兜鈴酸A對照品  B. 青木香樣品 (峰1為馬兜鈴酸A)

    3.4  標準曲線的制備  精密吸取對照品儲備液1、2、3、4、5、6ml,分別置10 ml的量瓶中,用無水乙醇稀釋至刻度。按2項下的色譜條件,依次進樣測定,測得AA-Ⅰ的峰面積。以AA-Ⅰ的進樣量(μg)為橫坐標,以對應的峰面積為縱坐標繪制標準曲線。由標準曲線可知,在0.08~0.40μg之間,進樣量與峰面積之間呈良好的線性關系,回歸方程為Y=1.7×105X+5248,相關系數R=0.9999。

    3.5  儀器精密度試驗  精密吸取對照品溶液10μl,按2項下的色譜條件,注入液相色譜儀,測定對照品溶液的峰面積,平行測定5次。結果見表1,表明精密度良好。 表1  精密度試驗結果

    3.6  穩定性試驗  在2項的色譜條件下,精密吸取供試液1:10μl,注入液相色譜儀,測定,然后于2、4、6、8、12、24h各測定1次,結果見表2,表明供試品溶液在24h內測定結果穩定。 表2  穩定性試驗結果

    3.7  重復性試驗  取青木香樣品0.6g,精密稱定,共稱取5份,照青木香樣品溶液的制備項下操作,制成供試品溶液。在2項下的色譜條件下,分別精密吸取供試品溶液各10μl,注入液相色譜儀,測定,計算AA-Ⅰ的質量。結果見表3,說明該方法的重復性良好。 表3  重復性試驗結果

    3.8  加樣回收率試驗  取0.2ml上述供試液1,用無水乙醇定容為1ml,取0.2ml上述供試液1,加入對照品溶液0.15ml,用無水乙醇定容為1ml;取對照品溶液0.15ml,用無水乙醇定容為1 ml,精密取以上各溶液10μl,按2.1項下的色譜條件測定,測定結果:回收率為(99.5±0.5)%,RSD為0.5%。

    3.9  青木香與滋陰補腎丸共煎前后AA-Ⅰ含量的變化(AA-Ⅰ的定量分析)  分別取供試液1、2,按2項下的色譜條件測定,并計算各樣品中AA-Ⅰ的含量,結果見圖2及表4。圖2  青木香與滋陰補腎丸共煎前、后的HPLC色譜圖比較 表4  青木香與滋陰補腎丸共煎后的AA-I含量

    結果表明,青木香與滋陰補腎丸共煎后,馬兜鈴酸A含量降低了45.16%,可見,滋陰補腎丸可以明顯降低青木香中馬兜鈴酸A的含量。

    4  討論

    國內外學者現已公認,青木香的腎毒性與其所含主要成分馬兜鈴酸有關,而其中馬兜鈴酸A為主要毒性成分[2],且含量較大,故將馬兜鈴酸A作為測試指標。在提取方法上為了盡量符合臨床實際,我們選用了加熱水提取的方法,提取次數為2次。

    青木香行氣止痛,解毒消腫,降血壓,主治胃腸疼痛、風濕性關節炎、跌打損傷、咽喉腫痛、高血壓病,外用治牙痛、毒蛇咬傷等癥[3]。濕熱之邪極易傷陰,同時青木香行氣亦易傷陰。故需配伍養陰藥,使邪正兼顧。腎陰為一身津陰之根,滋陰補腎丸為中醫滋補腎陰的代表方劑,滋補腎陰,增強正氣,既能補已傷之陰液,又能防陰液之再耗。其滋陰之作用,恰恰能制約青木香的行氣傷陰之性。因而滋陰補腎丸能夠降低青木香行氣傷陰的副作用。

    本研究表明,滋陰補腎丸可以明顯降低青木香中馬兜鈴酸A的含量,為青木香等含馬兜鈴酸類中藥的解毒提供了科學依據和新的思路。

【參考文獻】
  1 LI Q.Kidney injury due to Aristolochiac manshuriensis.Shandong J.Tradit Chin Med,1997,16(2):87.

2 Vanhaelen M,Vanhaelen-Fastre R,But P, et al.Identification of aristolochin acidi in Chinese herbs.Lancet,1949, (343):174.

3 XU G J.Pharmakognosie.Vol1.Beijing:People,s Medical Publishing House,1987,157.

(編輯:李 木)


作者單位:734000 甘肅張掖,張掖市藥品檢驗


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