摘要: 【摘要】 目的 檢測正常健康志愿者外周血CD34+、CD34+ CD38-細胞的絕對值及相對值，闡述其檢測意義。方法 用流式細胞儀進行測定。結果 健康志愿者外周血CD34+細胞絕對值（1。51）×107/L ，CD34+細胞占白細胞總數的（0。...
【摘要】 目的 檢測正常健康志愿者外周血CD34+、CD34+ CD38-細胞的絕對值及相對值，闡述其檢測意義。方法 用流式細胞儀進行測定。結果 健康志愿者外周血CD34+細胞絕對值（1.06±0.51）×107/L ，CD34+細胞占白細胞總數的（0.16±0.05）%；CD34+CD38-細胞絕對值（0.46±0.31）×107/L，CD34+CD38-細胞占白細胞總數的（0.07±0.04）%。結論 外周血CD34+細胞、CD34+ CD38-細胞測定，會為臨床多種血液病的診斷及預后判斷提供很重要的參考價值。
【關鍵詞】 流式細胞儀;造血干細胞
Determination and significance of CD34+ cell in peripheral venous blood of 25 healthy people
ZHANG De-jie,XIANG Yang,HUANG Shi-lin. Hematology Department of TCM,210 Hospital of PLA.Dalian 116021，China
【Abstract】 Objective To test the expression of CD34+、CD34+and CD38- cells in peripheral blood of healthy volunteers, and to discuss the clinical significance. Methods The expression was assayed by flow cytometry.Results The absolute value of CD34+ cells was（1.06±0.51）×107/L， occupied（0.16±0.05）% of white blood cell；That of CD34+CD38- cells was（0.46±0.31）×107/ L occupied（0.07±0.04）% of white blood cell.Conclusion The determination of CD34+ and CD34+ CD38- cells in peripheral blood will provide important reference value for the diagnosis and prognosis of many kinds of hematology diseases.
【Key words】 flow cytometry ; hematopoietic stem cell
CD34抗原主要在造血干細胞表面呈高度表達，其表達強弱具有明顯階段性，在干細胞和最早祖細胞階段表達最強。我們抽取了25例健康志愿者的外周血，對其CD34陽性細胞的百分比及絕對值進行了檢測。對其檢測意義進行了分析。
1 對象與方法
1．1 研究對象 25例18～24歲健康志愿者，均為男性。
1.2 主要試劑 PE標記的IgG1和CD34，FITC標記的IgG1和CD38單克隆抗體，溶血素A、B、C液均購自Immunotech公司。
1.3 標本采集及處理 取健康志愿者靜脈血1ml，置于EDTA抗凝管中混勻。
1.4 CD34+細胞及CD34+CD38-細胞的測定 分別取100μl靜脈血加入兩個試管中（其中一管為試驗管，另一管為對照管）。在對照管中分別加入20μl IgG1-PE和20μl IgG1-FITC，在試驗管中分別加入20μl CD34-PE和20μl CD38-FITC，輕輕混勻，室溫、避光放置20min。用A、B、C液溶血素溶血后，上流式細胞儀進行測定分析。
CD34+細胞及CD34+CD38-細胞絕對值的測定，采用雙平臺法。
1.5 統計學處理 數據采用SPSS10.0軟件分析，所得數據以（x±s）表示。
2 結果
見表1。表1 檢測結果
3 討論
目前普遍認為，用FCM和單克隆抗體技術直接檢測CD34+細胞是一種簡單、準確、快捷的檢測造血干細胞（HSC）的方法，可用于臨床進行常規檢查［1］。有學者認為CD34+CD38-更接近于造血干祖細胞。外周靜脈血檢測CD34陽性細胞，其特點為取材方便，細胞成分單一，測定誤差較小，本實驗通過對25例男性健康志愿者外周血進行CD34陽性細胞的檢測，得到一組正常參考值。外周血CD34+細胞檢測除用于干細胞移植時，對造血干細胞進行計數外，臨床上如果能對患者外周血CD34+細胞、CD34+ CD38-細胞進行準確測定，或用CD34結合其他單克隆抗體對血液細胞進行測定，這會為臨床多種血液病的診斷及預后判斷提供很重要的參考價值。比如再生障礙性貧血、慢性粒細胞白血病、骨髓增生異常綜合征等等。
再生障礙性貧血（AA）是一類T淋巴細胞功能亢進引起的造血功能衰竭性自身免疫性疾病。 石淑文［2］等曾檢測了34例初治AA患兒骨髓CD34+細胞百分率，發現其明顯低于對照組，且CD34+CD38+細胞和CD34+CD38-細胞同時相應減少，AA患者HSC損傷是全面的，無階段性差異，SAA患者比CAA患者骨髓CD34+細胞減少更加明顯。
慢性粒細胞白血病（CML）是一種克隆性造血干細胞的惡性增殖性疾病，在CML患者體內存在具有CD34抗原標志伴bcr/abl融合基因陽性的干細胞。有證據表明，bcr/abl+-CD34+細胞是導致CML耐藥及復發的重要原因之一。對CML患者進行CD34+細胞的檢測為疾病的發展和預后可提供參考［3］。
骨髓增生異常綜合征（MDS）是一組以髓系（粒系、紅系、巨核系）細胞發育異常而致骨髓衰竭為特征的髓系腫瘤，表現為粒系、紅系、巨核系一系或多系形態學異常和外周血細胞減少。MDS的診斷，特別是對那些原始細胞比例增高不明顯且無克隆性染色體核型異常的患者，基本上是靠排除性診斷［4］。Kiyoyuki Ogata等［5］對這些原始細胞比例增高不明顯且無克隆性染色體核型異常的MDS患者進行了CD34的檢測，發現其表達異常，其對MDS的診斷具有十分重要的診斷價值。
近年來，有較多的學者利用流式細胞術（FCM）檢測急性髓系白血病（AML）的微小殘留病變（MRD）。其原理主要以初治時白血病細胞所表達的白血病相關免疫表型（LAIP）為依據。由于AML免疫表型的多樣性和復雜性，給MRD的檢測帶來一定的困難。同時，目前的觀點認為白血病細胞來源于白血病干細胞（LSC），白血病細胞群體也是一個異質性的群體。大家普遍認為LSC存在于CD34+CD38-Lin-細胞亞群中。因此，對白血病患者骨髓或外周血進行CD34、CD38結合初治時白血病細胞的免疫表型分析進行MRD的檢測也已成為學者們探討的課題［6］。
【參考文獻】
1 尉達民，趙昕，祝陽，等.CD34陽性細胞測定在造血干細胞測定中的應用.北京醫科大學學報，1995，27：204-206.
2 石淑文，宋華，湯永民，等.34例小兒再生障礙性貧血骨髓CD34+細胞的檢測.中華血液學雜志，2002，23：267-268.
3 李澄宇，孟凡義，孫啟鑫，等.G-CSF對慢性粒細胞白血病患者bcr/abl+-CD34+細胞增殖、分化的影響. 中華血液學雜志，2007，11：762-765.
4 肖志堅，郝玉書.規范我國骨髓增生異常綜合征的實驗室檢查和診斷. 中華血液學雜志，2008，1：1-2.
5 Ogata K, Kishikawa Y, Satoh C,et al.Diagnostic application of flow cytometric characteristics of CD34+ cells in low-grade myelodysplastic syndromes. Blood,2006, 108:1037-1044.
6 曹暉，王亞哲，吳紅紅，等.CD7和（或）CD56陽性急性髓系白血病患者干細胞表型分析及在微量殘留病檢測中的意義. 中華血液學雜志，2008，1：23-28.
(編輯：守 中)
作者單位：116021 遼寧大連，解放軍第210醫院中醫血液科
