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清熱扶正湯對大鼠放射性直腸損傷的影響

來源:《中華醫學研究雜志》 作者: 2009-8-24

摘要: 【摘要】 目的 通過比較實驗組和對照組放射性直腸炎大鼠模型腸黏膜的病理變化及腫瘤壞死因子-α表達分析清熱扶正湯對放射性直腸損傷的作用機制。方法 成年健康Wista雄性大鼠62只,制作放射性直腸炎動物模型,直腸組織做病理檢查,并用免疫組化方法比較腫瘤壞死因子-α的表達。結果 中藥治療組的放射性直腸炎大鼠......


【摘要】  目的 通過比較實驗組和對照組放射性直腸炎大鼠模型腸黏膜的病理變化及腫瘤壞死因子-α表達分析清熱扶正湯對放射性直腸損傷的作用機制。方法 成年健康Wista雄性大鼠62只,制作放射性直腸炎動物模型,直腸組織做病理檢查,并用免疫組化方法比較腫瘤壞死因子-α的表達。結果 中藥治療組的放射性直腸炎大鼠直腸組織中腫瘤壞死因子-α的表達活性減低。結論 清熱扶正湯對放射性直腸損傷有明確的治療效果,其機制可能與其抑制腫瘤壞死因子-α的表達有關。

【關鍵詞】  放射治療;直腸炎;中藥;腫瘤壞死因子-α

 The effect of Fuzheng Qingre Decoction for radioactivity rectal injury of rats

    ZHU Li, LI Shuang-biao, PANG Rui-xia.Department of Gynaecology and Obstetrics, Chinese-Western Medical Combination Hospital, Cangzhou 061001,China

    【Abstract】  Objective   To analyze the mechanism of action of Fuzheng Qingre Decoction for radioactivity rectal injury by comparison of pathological change and tumor necrosis factor (TNF-α) expression in intestinal mucosa of radiation proctitis rat. Methods  62 matured medical fitness male rat were made into radiation proctitis animal model, and respectively coloclysised with western medicine and Chinese crude drug. Intestinal mucosa of the rats were checked pathologically, at the same time expression of TNF-αwas compared by immunohistochemistry method. Results  Intestinal mucosa of rats coloclysised with Chinese crude drug had more slight inflam change and the expression of TNF-αwas degraded. Conclusion  Fuzheng Qingre Decoction is available for radioactivity rectal injury and the effect related to it's restrain for expression of TNF-αpossibly.

    【Key words】  radiation therapy; proctitis; Chinese medicinal materials; tumor necrosis factor-α

    放射性直腸損傷是盆腔腫瘤放射治療的棘手問題,我院自2001年開展放射性直腸損傷的中藥治療,取得了良好的效果,為了解其機理,我們設計了大鼠的放射性直腸損傷模型,試圖通過對其進行病理學檢查和炎癥相關細胞因子的表達檢測分析其可能的作用機制。

    1  材料與方法

    1.1  動物實驗  成年健康Wista雄性大鼠62只,隨機分為四組,即空白對照組(2只)、實驗對照組(20只)、中藥治療組(20只)和西藥治療組(20只)。實驗組和中、西藥治療組均給予20Gy劑量的X線一次性照射,大鼠出現吐黃和血水便后即認為放射性直腸炎造模成功。實驗組大鼠給予隔日1次生理鹽水5ml灌腸,中、西藥治療組大鼠分別給予5ml中、西藥湯劑隔日1次灌腸。于1周時斷頭處死大鼠,取空白對照組2只,實驗對照組、中藥治療組和西藥治療組各20只,取直腸組織進行如下檢查。

    1.2  檢查方法  (1)1.5ml血液離心后(LD4-2A型低速離心機,北京醫用離心機廠生產)取上清液,用ELISA法檢測各組血清中腫瘤壞死因子-α的水平(TNF-α放免試劑盒,批號:0607,購自北京北方生物技術公司。SiN一695型智能放射免疫7測量儀,上海原子核研究所日環儀器一廠生產)。(2)切取直腸0.5cm,10% 甲醛溶液固定,石蠟包埋,HE染色,光學顯微鏡下觀察大鼠直腸黏膜病理組織學改變。(3)免疫組織化學染色,檢測TNF-α的表達。采用LSAB法,按試劑盒說明進行免疫組化檢測。用PBS代替一抗作為陰性對照。具體步驟為:常規石蠟切片,二甲苯脫蠟,梯度酒精逐級水化,把玻片置于3% 的H2O2中5min,阻斷內源性過氧化物酶活性,EDTA修復液中微波抗原修復10min,滴加正常山羊血清,室溫孵育15min,以封閉非特異性抗原,滴加第一抗體,稀釋度1:100,4℃過夜,滴加生物素標記的第二抗體,滴加LSAB復合物,DAB 顯色,蘇木素復染,60℃烤箱烤60min,中性樹膠封片。顯微鏡下觀察。結果判讀:主要考慮陽性細胞數及陽性信號出現的位置,陽性細胞數<25% 為“-”,25%~75% 為“+”,>75%為“++”。文中將(+~++)合并為陽性,以簡化數據處理。

    1.3  統計學處理  統計軟件用SPSS 11.0版本,采用χ2檢驗,P<0.05判為差異有顯著性。

    2  結果

    正常組大鼠直腸黏膜未見明顯充血、水腫、潰瘍,無炎癥細胞浸潤等病理組織學改變;實驗對照組可見明顯充血、水腫、潰瘍,較正常組比較有大量的炎癥細胞浸潤;西藥治療組可見明顯的炎性改變,但較實驗對照組輕;中藥治療組未見充血、水腫、潰瘍,僅有少量的炎癥細胞浸潤。

    中藥組的TNF-α水平與對照組及西藥組比較均有統計學差異。見表1。表1  各組大鼠血清TNF-α水平的影響

    TNF-α陽性表達為細胞的胞漿或胞核中出現棕黃色顆粒,而且著色較重;正常對照組組織中未見明顯TNF-α陽性表達;實驗對照組組織中的陽性表達主要以黏膜層細胞為著,黏膜層陽性細胞的數量顯著增加,而胞漿、胞核中陽性顆粒數達到98% ;西藥灌腸組黏膜層陽性細胞明顯增加,胞漿、胞核中陽性顆粒數為33%;中藥藥物處理組的陽性率15%,多見于黏膜下層、肌層、漿膜層內也可見少量的陽性表達。各組之間差異有顯著性 (P<0.05)。

    3  討論

    放射性直腸損傷是盆腔腫瘤放射療法的常見并發癥,其發生率可達13.3%[1]。放射性直腸損傷一旦發生,早期可影響放療方案的順利實施,降低放療效果;晚期部分患者可出現放射性腸潰瘍、腸瘺, 嚴重威脅患者的生存期和生活質量。 國內外學者對放射性腸損傷的治療研究一直比較關注,但到目前為止仍未獲得突破性進展。西藥常規治療多用激素、維生素、抗生素類灌腸,療效多不理想[2,3]。細胞因子抑制劑或以細胞因子為靶點治療腸損傷被普遍認為是一種很有前途的有效治療方法,目前也僅處于嘗試階段,加上成本昂貴,即使成功亦不易推廣。近年來,從具有中國特色的中醫藥和天然藥物中尋找抗輻射劑已經受到界內專家們的極大重視。

    在多種炎性疾病中都有腫瘤壞死因子(TNF)的參與[4,5],在炎癥性腸病的發病機制中它更占有重要的地位[6~8]。腫瘤壞死因子的血清水平和炎癥性腸病正相關,并且反映炎性腸病病情和療效。它可以刺激各種炎癥介質產生,增強、放大炎癥連鎖反應,造成腸黏膜損傷;TNF-α能夠與血管內皮細胞上高親和力受體結合,并通過上調其黏附分子趨化性細胞因子IL-28的表達增加炎癥細胞的聚集,使血管通透性升高,在IL-26參與下, TNF-α誘導凝血酶形成,減少血栓調節素的釋放,激活組織因子促進血栓形成,同時抑制纖溶酶原激活抑制劑-21的合成而導致機體處于促凝血狀態, TNF-α能誘導促凝血組織因子僅在內皮損傷部位釋放,從而激活外源性凝血途徑,使黏膜小血管在炎癥基礎上形成微血栓,造成腸組織微循環障礙。

    已有研究表明某些中藥具有抑制TNF-α表達,保護腸道黏膜的作用[9]。我們的實驗中,中藥灌腸的大鼠結腸炎癥表現明顯輕于實驗對照組和西藥灌腸組,并且中藥灌腸組的大鼠結腸組織腫瘤壞死因子-α表達活性減低,說明雖然其中間環節還不清楚,清熱扶正湯通過抑制腫瘤壞死因子-α表達應該是其治療和預防放射線性直腸損傷的機制之一。

【參考文獻】
  1 谷銑之,殷蔚伯,劉泰福,等.腫瘤放射性治療學.北京:北京醫科大學、中國協和醫科大學聯合出版社,1993,638.

2 王瑗,王萍,清紅.思蜜達保留灌腸治療中重度放射性直腸炎.臨床腫瘤學雜志,2004,9(1):87.

3 陳謙,錢健升,劉敬.中藥保留灌腸對放射性直腸炎的預防及治療.陜西中醫,2004,25(9):795-796.

4 易夢秋,孫曉莉,鄭雪冰.生脈注射液對心肺復蘇中腫瘤壞死因子-α、白細胞介素-8調控的臨床研究.中國綜合臨床,2008,24(5):429-431.

5 李甲辰,李勇.大黃對急性重癥胰腺炎合并肝損害時白細胞介素-6、腫瘤壞死因子-α和氧自由基的影響.中國綜合臨床,2007,23(8):694-697.

6 Papadakis KA,Targan SR. I'umor necrosis factor:biology and therapeutic inhibitors.Gastroenterology,2000,1 19:1148-1149.

7 張道權,吳正祥.炎癥性腸病的抗腫瘤壞死因子治療安全評價.臨床薈萃,2007,22(2):145-147.

8 張慶殷.白細胞介素8與炎癥的關系及其檢測方法.國外醫學·臨床生物化學與檢驗學分冊,1994,15(6): 267-269.

9 溫志新,王輝,陳海龍,等.大鼠腸巨噬細胞腸上皮細胞分泌TNF-α的規律及藥物作用的研究.實用醫技雜志,2007,14(8):990-991.

(編輯:欣 陽)


作者單位:061001 河北滄州,滄州中西醫結合醫院婦產科


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