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自動滴定與手工滴定pH計在血漿蛋白分離中pH值檢測結果的比較

來源:中華醫學研究雜志 作者:郭廣兆,張安山何彥林,楊曉東 2011-6-29

摘要: 05),但兩組數據標準差差異較大,手工滴定的pH值離散性明顯大于自動滴定pH值。結論 自動滴定和手工滴定雖然都達到期望值范圍,但自動滴定操作簡單、精確,獲得的pH值一致性好,手工滴定操作復雜,精確度較低,獲得的pH值離散性較大。pH值滴定。緩沖液 在人血漿蛋白分離工藝中,各種成分的有效分離,達到較高的收率是至......


【摘要】  目的 使用TIM856自動滴定與G103手工滴定兩種不同pH計在人血漿蛋白分離中對pH值檢測結果比較。方法 在血漿蛋白分離中對血漿蛋白組分I和組分Ⅳ的制作進行pH值的滴定,依據滴定值對血漿蛋白組分I和組分Ⅳ加緩沖液進行pH值調整,比較兩種不同滴定方式對最終pH值結果的影響。結果 使用兩種不同滴定方式最終pH值的結果差異無顯著性(P>0.05),但兩組數據標準差差異較大,手工滴定的pH值離散性明顯大于自動滴定pH值。結論 自動滴定和手工滴定雖然都達到期望值范圍,但自動滴定操作簡單、精確,獲得的pH值一致性好,手工滴定操作復雜,精確度較低,獲得的pH值離散性較大。

【關鍵詞】  血漿蛋白分離;pH值滴定;緩沖液

在人血漿蛋白分離工藝中,各種成分的有效分離,達到較高的收率是至關重要的環節,目前已被廣泛采用的低溫乙醇法分離血漿蛋白工藝[1],主要依據其5個重要生產工藝可變參數為(溫度、pH、乙醇濃度、離子強度和蛋白濃度)。pH值調控蛋白電荷狀態,越接近其等電點(i.e.p),蛋白越容易沉淀,從而達到工藝所期望的分離效果,pH計作為分離工藝中對血漿蛋白溶液的氫離子濃度的測定手段是至關重要的。準確的添加緩沖液的量來控制工藝所要求的pH范圍,通過對小樣品滴定的方式所獲得的緩沖液的量,利用計算公式放大來實現對血漿蛋白該生產步驟pH值的控制。以往我們使用的手工滴定的方式。隨著技術的不斷更新,目前采用的自動滴定的方式,現將兩種不同滴定方式來控制血漿蛋白溶液pH值的結果報告如下。

  1 材料與方法

  1.1 手工滴定pH值主要設備 pH-METER G103 pH計;復合電極;溫度探頭;廠家:奧地利標準液CertiPUR○R,7.00  4.00 廠家:德國,MERCK公司。

  1.2 自動滴定pH值主要設備 TIM856自動滴定pH計;復合電極:pHC2005-8;溫度探頭:T201;標準液:TUPAC,7.00 4.005;廠家:法國Radiometer analytical公司。

  1.3 pH值滴定方法

  1.3.1 手工滴定方法

  1.3.1.1 分離組分Ⅰ pH值范圍7.15~7.25,4000kg血漿蛋白溶液,各取1kg兩個樣品,使用2ml吸管吸取pH 4緩沖液磁力攪拌下滴加兩個樣品pH至7.18,1:5稀釋兩個滴加pH 4緩沖液的樣品,pH值均在7.15~7.25之間時,取兩個滴加緩沖液量的平均值(若稀釋后pH不在7.15~7.25之間,應重新滴定)。放大到4000kg,計算pH 4緩沖液量加入制品中,最終檢測4000kg血漿蛋白溶液的pH值。

  1.3.1.2 分離組分Ⅳ pH值范圍5.80~5.90,10000kg制品溶液,各取1kg兩個樣品,使用10ml吸管吸取0.872mol NaHCO3緩沖液磁力攪拌下滴加兩個樣品pH值至5.85,1:10稀釋兩個滴加0.872mol NaHCO3緩沖液的樣品,pH值均在5.80~5.90之間時,取兩個滴加緩沖液的平均值(若稀釋后pH不在5.80~5.90之間,應重新滴定),放大到10000kg,計算0.842mol NaHCO3緩沖液加放制品中,最終檢測10000kg制品溶液的pH值。

  1.3.2 自動滴定方法 步驟同上,將pH計期望值設定為7.18或5.85,pH計將自動滴加緩沖液,pH到7.18或5.85時,自動停止加緩沖液。

  2 統計學方法

  對各20批次pH值做趨勢圖;應用SPSS 11.5統計學軟件,對所得的各組數據分別進行檢驗和標準差分析,對P<0.05為差異有顯著性。

  3 結果

  手工滴定與自動滴定pH值分離組分I制品pH值20批次趨勢圖見圖1。

  手工滴定與自動滴定pH值分離組分Ⅳ制品pH值20批次趨勢圖見圖2。圖1 手工滴定與自動滴定pH值分離組分Ⅰ制品20批次趨勢圖

  圖2 手工滴定與自動滴定pH值分離組分Ⅵ制品20批次趨勢圖 對手工滴定與自動滴定pH值各20批次pH值進行統計學分析見表1。表1 兩種不同滴定方法pH值的比較FI手動滴定pH值標準差大于自動滴定pH值標準差,離散性大。

  4 討論

  手工和自動滴定pH從控制pH值的角度來看都能達到目的,但從兩組數據的離散度和從pH值的趨勢圖可以看出,手工滴定方法獲得的數值離散性大、曲線為鋸齒狀,而自動滴定方法獲得的數值離散性小、曲線為比較光滑的曲線,導致這一結果的原因主要有以下幾個方面。第一,手工滴定使用吸管,2ml吸管的精確度為0.02ml,10ml吸管的精確度為0.10ml自動滴定管的精確度為0.01ml,精確度差別明顯。第二,手工滴定時,工作人員讀取滴加緩沖液的量時誤差明顯大于自動滴定的值。第三,因手工滴加緩沖液時個人滴加快慢程度有差異,往往手工滴定有超出期望值的情況,造成重復滴定,而且與期望值有明顯差異;而自動滴定設定pH值后,pH計將勻速滴加緩沖液,當pH值接近期望值時,pH計將自動降低滴加速度,pH值到期望值時加液將自動終止,每次滴定均能達到期望值。隨著科學技術的不斷更新,新型設備的不斷使用,在血漿蛋白分離中如何更好地控制不同組分的分離[2],使寶貴的人血漿資源最大限度得到充分利用,獲取更大的收獲率已經是每個血液制品生產企業的共識。在不斷完善的GMP[3]管理中,制品的批間差越小,制品的質量指標越穩定在一個小的范圍已經是考查一個工藝穩定性的重要指標。在使用自動滴定pH計后,不但大大減少了工作人員的工作強度,也避免了人為因素導致的批間差。因此新技術、新設備的不斷開發和使用,將為人血漿蛋白的分離純化、血漿資源的綜合利用,不斷提高血液制品的安全性和產品質量起到積極的作用。

【參考文獻】
    1 劉湘編.輸血療法與血液制劑(低溫乙醇法).北京:人民衛生出版社,1996,155-173.

  2 張安山,周海云.實現自控分離對人血漿蛋白質量的影響.中國生物制品學雜志,2007,20(7):531-533.

  3 國家食品藥品監督管理局,藥品生產質量管理規范(1998年修訂),1999.

  



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