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健胃補脾湯抗小鼠乙醇性胃黏膜損傷的作用*

來源:中華醫學研究雜志 作者:林輝1,徐倩1,王唯2,王春英1,許霞1,劉芳1,劉紅1 2013-2-26

摘要: 【摘要】 目的研究健胃補脾湯對乙醇所致小鼠胃黏膜損傷的保護作用及其機制。方法將健康昆明小白鼠120只,隨機分成5組:正常對照組、模型對照組、中藥低劑量組、中藥中劑量組和中藥高劑量組。中藥低、中、高劑量組分別以3ml/kg鼠重、6ml/kg鼠重、12ml/kg鼠重健胃補脾湯水煎劑灌胃,之后再以8ml/kg鼠重25%乙醇溶液灌胃......


【摘要】  目的研究健胃補脾湯對乙醇所致小鼠胃黏膜損傷的保護作用及其機制。方法將健康昆明小白鼠120只,隨機分成5組:正常對照組、模型對照組、中藥低劑量組、中藥中劑量組和中藥高劑量組。中藥低、中、高劑量組分別以3ml/kg鼠重、6ml/kg鼠重、12ml/kg鼠重健胃補脾湯水煎劑灌胃,之后再以8ml/kg鼠重25%乙醇溶液灌胃;模型對照組以8ml/kg鼠重25%乙醇溶液灌胃;正常對照組以8ml/kg鼠重生理鹽水灌胃。以上各組按上述給藥方法每日1次,連續給藥7天。于第6天給藥結束后,禁食不禁水24h。末次給藥后2h,分別測定各組的血清中一氧化氮(NO)和前列腺素E2(PGE2)的含量,并在光學顯微鏡下觀察小鼠胃黏膜組織學變化,以評價藥物對胃黏膜損傷的預防保護效果。結果血清中NO含量,模型對照組與各中藥治療組血清NO含量均顯著低于正常對照組,且具有統計學意義;中藥低劑量組血清NO含量高于模型對照組,但不具有統計學意義;中藥中劑量組血清NO含量高于模型對照組,且具有統計學意義;中藥高劑量組血清NO含量顯著高于模型對照組,且具有統計學意義;各中藥治療組之間,中藥低劑量組與中藥中劑量組、中藥高劑量組存在統計學意義;中藥中劑量組與中藥高劑量組之間不存在統計學意義。血清中PGE2含量,模型對照組與各中藥治療組血清PGE2含量均顯著低于正常對照組,且具有統計學意義;中藥低劑量組血清PGE2含量高于模型對照組,但不具有統計學意義;中藥中劑量組與高劑量組血清PGE2含量高于模型對照組,且具有統計學意義。各中藥治療組之間,中藥低劑量組與中藥中劑量組,以及中藥中劑量組與中藥高劑量組之間不存在統計學意義,中藥低劑量組與中藥高劑量組之間存在統計學意義。光鏡也顯示中藥低劑量組、中藥中劑量組和中藥高劑量組的損傷程度及炎癥反應較模型對照組明顯減輕。結論健胃補脾湯對乙醇所致的小鼠胃黏膜損傷有一定的預防保護作用,其保護作用是通過增加血清NO和PGE2,從而舒張血管,增加胃黏膜血流量來實現的。

【關鍵詞】  健胃補脾湯;小鼠;乙醇性胃黏膜損傷;血清NO;血清PGE2

  急性胃黏膜病變系指機體在嚴重創傷、感染、休克等應激狀態下,發生以胃黏膜損害為主的病理改變和上消化道出血為特征的臨床病征[1]。在正常生理狀態下,胃黏膜的屏障作用能抵御各種外源性和內源性損傷物質的攻擊,維持胃腔與胃黏膜內氫離子梯度狀態。而在攻擊因子的刺激或應激狀態下,將會導致胃黏膜屏障破壞,如乙醇在胃內經乙醇脫氫酶作用可被氧化成乙醛而損傷胃黏膜,乙醇可影響胃酸分泌、引起胃組織產生損傷性介質使胃黏膜損傷性因素增強,損傷胃黏膜屏障、減少胃黏膜保護性物質含量[2,3]。臨床主要使用H2受體拮抗劑或質子泵抑制劑抑制胃酸分泌,或具有黏膜保護作用的藥物如硫糖鋁作為預防措施。但有相當一部分患者或者癥狀無明顯改善,或者需要長期服藥,停藥后癥狀易復發,且存在副作用大、作用單一等缺點。而中醫中藥防治胃黏膜損傷有其自身特點及優勢,可多靶點、多層次、多途徑保護胃黏膜。近年來許多學者在此領域做了大量研究工作,發現并證實許多中藥單味藥及復方制劑具有明顯的胃黏膜保護作用。常江[4]通過對大鼠乙醇性急性胃黏膜損傷的研究,采用Corne和Bolton的阿辛藍染色法測定證實,丹參可促進胃壁結合黏液分泌,先后用消炎痛抑制和外源性PGE1反抑制實驗,提示其促進黏液分泌作用可能部分是由刺激內源性的前列腺素(PGs)合成和釋放所介導。預先灌服香砂六君子湯煎劑后經大鼠胃內注入0.2mol/L NaOH的實驗顯示該方能明顯抗NaOH造成的胃黏膜出血及條索狀的損傷。洪纓[5]用阿辛藍染色法測胃壁結合黏液量顯示該方有增加胃壁結合黏液量的趨勢。劉寶臣[6]用人參、黃芪、甘草、白芍等健脾益氣中藥制成“胃黏膜保護方”,發現可以預防乙醇、強酸、強堿造成的黏膜出血性損傷。健胃補脾湯是臨床治療胃脘痛、嘈雜的經驗方,選用黨參、白術、茯苓、甘草、半夏、陳皮、黃連、吳茱萸、海螵蛸、煅瓦楞子、蒲公英、白及十二味中藥。本實驗旨在通過動物實驗觀察健胃補脾湯對乙醇性胃黏膜損傷的預防和保護作用,并從血清NO、血漿前列腺素E2等多方面探索可能的作用機制。

  1材料與方法

  1.1實驗動物健康昆明小白鼠120只,體重25~30g,雌雄各半,浙江中醫藥大學實驗動物中心提供。標準飼料飼養于浙江中醫藥大學實驗動物中心。

  1.2實驗藥品95%乙醇:500ml/瓶,浙江省中醫院,批號:090825;氯化鈉注射液:250ml/瓶,浙江平湖莎普愛思制藥有限公司,批號:090913;總一氧化氮檢測試劑盒:江蘇海門碧云天生物技術研究所,批號:20090418;小鼠前列腺素E2試劑盒:上海西唐生物科技有限公司,批號:20090604。

  1.3實驗器材小鼠灌胃器,燒杯,量桶,電子分析天平(上海天平儀器廠),臺式高速離心機(上海醫用離心機廠),Olympus光學顯微鏡(日本Olympus公司)。

  1.4藥物制備

  1.4.125%乙醇制備取適量95%乙醇,用生理鹽水配制成25%乙醇溶液。

  1.4.2健胃補脾湯制備黨參10.0g,白術10.0g,茯苓10.0g,甘草6.0g,陳皮10.0g,制半夏10.0g,黃連6.0g,吳茱萸3.0g,海螵蛸15.0g,煅瓦楞子15.0g,蒲公英15.0g,白及10.0g,上述十二味藥藥材均由浙江中醫藥大學附屬第一醫院中藥房提供,并在中藥房煎取水煎劑。

  1.5實驗方法

  1.5.1動物選擇與分組取健康昆明小白鼠120只,體重25~30g,稱重后編號,隨機分成5組,每組雌雄各半,分別為正常對照組、模型對照組、中藥低劑量組、中藥中劑量組和中藥高劑量組,每組動物均為24只。

  1.5.2實驗步驟中藥低劑量組3ml/kg鼠重,健胃補脾湯水煎劑灌胃;中藥中劑量組6ml/kg鼠重,健胃補脾湯水煎劑灌胃;中藥高劑量組12ml/kg鼠重,健胃補脾湯水煎劑灌胃,之后再以8ml/kg鼠重,25%乙醇溶液灌胃。模型對照組以8ml/kg鼠重 ,25%乙醇溶液灌胃;正常對照組以8ml/kg鼠重,生理鹽水灌胃。以上各組按上述給藥方法每日1次,連續給藥7天。于第6天給藥結束后,立即禁食不禁水24h。末次給藥后2h,以眼球摘除法取血及處死;剖腹取胃后,沿胃大彎剪開胃,4℃的生理鹽水中輕輕漂洗后,于胃竇部剪取胃組織。

  1.5.3觀察指標

  1.5.3.1病理學檢查在胃竇的相同部位切取5mm×5mm的胃黏膜組織,用10%甲醛固定,常規脫水,石蠟包埋,4μm厚度連續切片,HE染色,在顯微鏡下觀察各組胃黏膜的病理學改變。

  1.5.3.2各組血清中一氧化氮(NO)的含量取小鼠血1ml,注入1.5 ml的離心管中,靜置10min,4℃下2500r/m離心,20min后取上清液(≥50μl),-20℃保存至測定。以Griess法檢測血清NO含量,測定時嚴格按照說明書操作進行。

  1.5.3.3各組血清中前列腺素E2(PGE2)的含量取小鼠血1ml,注入1.5ml的離心管中,靜置10min,4℃下2500r/m離心,20min后取上清液,-20℃保存至測定。以ELISA法檢測血清中PGE2含量,測定時嚴格按照說明書操作進行。

  1.6統計學方法計量資料用均數±標準差(x±s)表示。用SPSS13.0軟件統計包對各組數據進行統計分析。多組間均數比較用方差分析,均數間兩兩比較用q檢驗。均以P<0.05為差異有統計學意義。

  2結果

  2.1各組小鼠胃黏膜改變

  2.1.1肉眼大體觀察正常對照組小鼠胃黏膜呈粉紅色,表面光滑,黏膜皺襞光整,表面無充血水腫,未見潰瘍、糜爛、出血點。模型對照組小鼠胃黏膜皺襞光整,可見點狀出血點。中藥治療組小鼠胃黏膜皺襞光整,其中低劑量組偶見點狀出血點。

  2.1.2病理學檢查病理學檢查顯示:在光學顯微鏡下,正常對照組胃黏膜結構正常,層次清楚,黏膜層無炎性細胞浸潤;模型對照組上皮局部腺體結構紊亂,黏膜表面及腺腔內少量炎性滲出物,高倍鏡下中性粒細胞增多明顯。各中藥治療組腺體排列較整齊,少量炎性細胞浸潤,未見壞死組織及出血。

  2.2各組血清中NO的含量見表1。表1各組血清中NO的含量表1結果顯示血清NO含量,模型對照組與各中藥治療組血清NO含量均顯著低于正常對照組,且差異有統計學意義(P<0.01);中藥低劑量組血清NO含量高于模型對照組,但差異無統計學意義(P>0.05);中藥中劑量組血清NO含量高于模型對照組,且具有統計學意義(P<0.05),中藥高劑量組血清NO含量顯著高于模型對照組,且差異有統計學意義(P<0.01)。各中藥治療組之間,中藥低劑量組與中藥中劑量組、中藥高劑量組比較差異有統計學意義(P<0.05),中藥中劑量組與中藥高劑量組之間差異無統計學意義(P>0.05)。

  2.3各組血清中PGE2的含量見表2。表2各組血清中PGE2的含量表2結果顯示血清PGE2含量,模型對照組與各中藥治療組血清PGE2含量均顯著低于正常對照組,且差異有統計學意義(P<0.01);中藥低劑量組血清PGE2含量高于模型對照組,但差異無有統計學意義(P>0.05);中藥中劑量組與高劑量組血清PGE2含量高于模型對照組,且差異有統計學意義(P<0.05)。各中藥治療組之間,中藥低劑量組與中藥中劑量組,以及中藥中劑量組與中藥高劑量組之間差異無統計學意義(P>0.05),中藥低劑量組與中藥高劑量組之間差異有統計學意義(P<0.05)。

  3討論

  胃是乙醇較早接觸的重要器官,乙醇經胃吸收后, 由于胃內存在有乙醇脫氫酶和黃嘌呤氧化酶, 前者催化乙醇生成乙醛, 后者可催化乙醛代謝產生自由基,自由基在酒精性胃黏膜損傷過程中具有重要作用[7,8]。乙醇作為一種損傷因子,是常見的急性胃黏膜損傷模型之一[9]。實驗研究表明,乙醇性胃黏膜損傷時,胃黏膜充血、水腫,甚者糜爛和出血,病理改變是胃黏膜損傷,如腺體結構紊亂、炎性滲出等。本實驗結果顯示:25%的乙醇灌胃所致的胃黏膜損傷,預先給予小鼠胃內灌注健胃補脾湯,可減輕胃黏膜的損傷程度。肉眼大體觀察模型對照組小鼠胃黏膜皺襞光整,可見點狀出血點。而中藥治療組小鼠胃黏膜皺襞光整,其中低劑量組偶見點狀出血點。國內外研究表明,氧自由基的大量生成是乙醇性急性胃黏膜損傷的重要發生機制之一。內源性NO能夠清除氧自由基,改善胃黏膜微循環,減輕急性胃黏膜損傷程度,對胃黏膜有保護作用[10]。NO作為內源性血管舒張因子,可有效舒張血管,增加胃黏膜血流量,降低血管的通透性以維持血管壁的完整性,防止胃黏膜損傷,并可促進黏液合成,增加黏液層厚度,加強黏液屏障作用,抑制胃酸分泌。根據本實驗研究血清NO的含量結果顯示,健胃補脾湯對乙醇性胃黏膜損傷的保護作用,可能是通過提高血清NO含量實現的,并存在量效關系,中、高劑量的保護作用要優于低劑量。實驗研究[11,12]認為前列腺素(PGE2)合成減少可能在乙醇引起胃黏膜損傷中起著重要作用。據本實驗結果顯示,測定血清中PGE2的含量表明,健胃補脾湯有提高血清PGE2的作用,從而對乙醇性胃黏膜損傷起保護作用,并存在量效關系,中、高劑量的保護作用要優于低劑量。

  4結論

  本實驗證實,健胃補脾湯對乙醇性胃黏膜損傷具有較好的預防和保護作用,其中中劑量與高劑量的效果比低劑量更好。健胃補脾湯可一定程度增加血清NO含量,且存在量效關系。這是其預防和保護乙醇性胃黏膜損傷的作用機制之一。健胃補脾湯可一定程度增加血清PGE2含量,且存在量效關系。這是其預防和保護乙醇性胃黏膜損傷的作用機制之一。

【參考文獻】
   1王炳煌. 急性胃黏膜病變的診治現狀與展望. 中國普外基礎與臨床雜志,2000,7(3):37-39.

  2何紹珍,任建林. 乙醇對胃黏膜作用機制的研究進展. 世界華人消化雜志,2005,(21):15-17.

  3房殿春,彭志紅. 胃黏膜屏障功能研究概況. 現代消化及介入診療,2007,(1):21-23.

  4常江,鄧長生,沈佩弟,等. 丹參對大鼠乙醇性胃黏膜損傷的保護作用的研究. 中國病理生理雜志,1994,10(1):27-29.

  5洪纓,孟紫芊,馮衛紅,等. 小柴胡湯、香砂六君子湯對胃黏膜保護作用的實驗研究. 北京中醫藥大學學報,1994,17(5):57-59.

  6劉寶臣,沈鷹. 胃黏膜保護方對大白鼠黏液和胃黏膜血流的作用. 中華消化雜志,1990,10(6):359.

  7Brzozowski T, Konturek PC, Konturek SJ, et al.Implications of reactive oxygen species and cytokines in gastroprotection against stress-induced gastric damage by nitric oxide releasing aspirin. Int J Colorectal Dis,2003,18: 320-329.

  8Kwiecien S, Brzozowski T, Konturek SJ. Effects of reactive oxygen species action on gastric mucosa in various models of mucosal injury. J Physiol Pharmacol,2002,53: 39-50.

  9謝勇,李小平,王崇文,等.實驗性乙醇胃黏膜損害中胃腸激素表達變化及意義.中國現代醫學雜志. 1998,3(11):151-157.

  10李春艷,劉麗娜,呂申,等.一氧化氮與氧自由基在大鼠急性乙醇性胃黏膜損傷中的作用.中國病理生理雜志,2004,20(10):1777.

  11Liu ES, Wong BC, Cho CH. Influence of gender difference and gastritis on gastric ulcer formation in rats. J Gastroenterol Hepatol,2001,16:740-747.

  12Saeki T, Ohno T, Kamata K,et al. Mild irritant prevents ethanol-induced gastric mucosal microcirculatory disturbances through actions of calcitonin gene-related peptide and PG12 in rats. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol,2004,286: 68-75.

  


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