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HPLC法測定復方檗龍片中鹽酸小檗堿的含量

來源:中華現代臨床醫學雜志 作者:陳 志1,王成永2△作者單位:1 246001 安徽安慶,安慶 2013-9-26
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摘要: 【摘要】 目的 采用反相高效液相色譜(HPLC)法測定復方檗龍片中鹽酸小檗堿的含量。結論 本方法簡便、準確、重復性好,可用于復方檗龍片中鹽酸小檗堿的含量測定。 【關鍵詞】 鹽酸小檗堿。復方檗龍片。...


【摘要】  目的 采用反相高效液相色譜(HPLC)法測定復方檗龍片中鹽酸小檗堿的含量。方法 色譜柱:依利特C18(250mm×4.6mm,5μm),流動相:乙腈-水-0.6%磷酸二氫鉀-0.3%十二烷基磺酸鈉(100:100:1:1),流速:1.0ml/min,柱溫:40℃,檢測波長為345nm。結果 線性關系良好,線性范圍21.2~318.0 ng/ml;Y=3510000X-15900,r2=0.9998,平均回收率為98.59%,RSD:0.34%。結論 本方法簡便、準確、重復性好,可用于復方檗龍片中鹽酸小檗堿的含量測定。

【關鍵詞】  鹽酸小檗堿;復方檗龍片;含量測定;HPLC

  Objective To establish an HPLC method to determine berberine from prescription of berberine.Methods Yilite C18(250mm×4.6mm,5μm)column was used, the mobile phase consisted of methyl cyanide-water-0.6%KDP-0.3%SDS(100:100:1:1), the flow rate was 1.0ml/min and the UV detector was set at 345nm. Results The method displayed good linearity within the concentration ranges of 21.2~318.0ng/ml(r2=0.9998). The average recovery was 98.59%, RSD:0.34%.Conclusion This method is simple, accurate, replicate and suitable for the determination of berberine in prescription of berberine.

  [Key words] berberine;prescription of berberine pill;determination;HPLC

  復方檗龍片,由龍膽花、小檗皮、甘草、木香、陳皮等多味中藥材組成,含有龍膽堿、龍膽苦苷、三萜皂苷類成分、生物堿及莨菪類成分等,具清熱化痰,止咳平喘的功效[1]。小檗堿是主要有效成分之一,臨床主要用于治療胃腸炎、細菌性痢疾等腸道感染、眼結膜炎[2,3]。本實驗建立HPLC法測定復方檗龍片中鹽酸小檗堿的含量,簡便、快速、準確、專屬性好,適用于制劑的含量測定和質量控制。

  1 儀器與試藥

  1.1 儀器

  島津HPLC色譜儀(LC-10ATvp泵,SPD-10Avp紫外檢測器),Anastar色譜工作站;梅特勒AE-240雙量程電子分析天平;雷磁PHS-3C精密pH計。

  1.2 試藥

  鹽酸小檗堿對照品(由中國藥品生物制品檢定所提供,07139906,純度99.68%),供試品為市場抽樣;乙腈(色譜純,德國默克,SF81219),水為重蒸餾水,磷酸二氫鉀(分析純,南京化學試劑一廠,20071121),其他試劑為分析純。

  2 方法與結果

  2.1 色譜條件

  色譜柱:依利特C18(250mm×4.6mm,5μm);流動相:乙腈-水-0.6%磷酸二氫鉀-0.3%十二烷基磺酸鈉(100:100:1:1);流速:1.0ml/min;柱溫:40℃;檢測波長:345nm;進樣量:10μl。

  2.2 對照品及供試品溶液制備

  2.2.1 對照品溶液

  精密稱取鹽酸小檗堿對照品2.12mg,置100ml量瓶中,加50%甲醇溶液溶解并稀釋至刻度,搖勻,即得21.2μg/ml鹽酸小檗堿對照品溶液。

  2.2.2 供試品溶液

  取復方檗龍片20片,研細,取細粉約1片量,精密稱定,置100ml容量瓶中,精密加入甲醇40ml,超聲處理20min,放冷,加甲醇至刻度,搖勻,靜置30min,濾過,取續濾液作為供試品溶液。

  2.3 線性關系考察

  取“2.2.1”項下對照品溶液(21.2μg/ml)適量,分別用50%甲醇溶液稀釋配成21.2、63.6、106.0、148.4、190.8、318.0ng/ml。按“2.1”色譜條件項下,取10μl進樣分析,記錄峰面積,并以峰面積(A)與樣品濃度(X)用最小二乘法進行線性回歸,回歸方程為:A=3510000X+15900,相關系數r2=0.9998,線性范圍為21.2~318.0ng/ml。表明在該濃度范圍內與峰面積線性關系良好,以鹽酸小檗堿峰計算理論板數為:4512,分離度為1.7。

  2.4 專屬性試驗

  取不含鹽酸小檗堿的陰性片粉適量,按供試品溶液制備方法制備空白對照溶液,進樣10μl,記錄色譜圖結果:在該色譜條件下,空白輔料、鹽酸小檗堿在主峰保留時間處無色譜峰干擾,見圖1。 A鹽酸小檗堿對照品色譜圖B空白溶液色譜圖  C鹽酸小檗堿含量測定色譜圖圖1 鹽酸小檗堿HPLC圖譜

  2.5 精密度試驗

  按“2.3”線性關系考察項下,用流動相稀釋配成低、中、高對照品溶液(63.6、148.4、318.0ng/ml),連續進樣3次,記錄色譜圖和峰面積,計算RSD分別為:0.42%、0.29%、0.17%(n=3),結果表明精密度良好。

  2.6 穩定性實驗

  取樣品供試液于0、2、4、6、8h,進樣10μl,峰面積結果穩定。實驗結果表明,樣品供試液在8h內穩定性良好。

  2.7 加樣回收率實驗

  取已知含量的樣品細粉約1片量,精密稱定,按“2.1.2”項下方法處理后,取續濾液10ml,分別加入對照品溶液(21.2μg/ml)15、20、24、30、36ml,按上述樣品制備方法和色譜條件,制備加樣回收供試品溶液并注入高效液相色譜儀,記錄色譜圖,計算平均回收率為(98.59±0.33)%。回收率=(測得量-樣品含量)/加入量×100%,結果表明,該方法加樣回收良好,見表1。表1 加樣回收率試驗結果

  2.8 供試品測定

  取供試品4批,分別按“2.2.2”和“2.1”項下操作,色譜條件,10μl進樣分析,記錄色譜圖,計算三批樣品的含量,結果見表2。表2 樣品中鹽酸小檗堿的含量測定結果

  3 討論

  鹽酸小檗堿含量測定的方法文獻報道較多,文獻[4]采用三元絡合物比色法測定,文獻[5]采用紫外分光光度法測定,但這靈敏度較低;文獻[6]采用反相高效液相色譜法測定含量,樣品采用中性氧化鋁吸附法制備,該方法操作繁瑣,變異較大;由于中藥成分較多較復雜,目標化合物能夠有效分離,通常樣本分析時間很長[7],而且藥材因種間、產地以及收購時間等各方面的因素對其主要有效成分含量均有較大的影響。筆者用乙腈-水-0.6%磷酸二氫鉀-0.3%十二烷基磺酸鈉(100:100:1:1)為流動相,流速:1.0ml/min,柱溫:40℃,檢測波長為345nm,該方法快速、靈敏、特異性好,適合該制劑的含量測定和質量控制。

【參考文獻】
   1 楊春生,楊風梅,歐陽彪.雙波長薄層掃描法測定小檗皮中鹽酸小檗堿的合量.青海醫藥雜志,2001,31(8):58-59.

  2 龍小華,厲輝,黃嶸.復方苦參洗劑中小檗堿的含量測定.中國藥師,2004,7(12):233-234.

  3 奚燕,余敏英,楊銘,等.黃連素軟膏中鹽酸小檗堿的含量測定.上海中醫藥大學學報,2004,17(4):86-87.

  4 霍達,王英鋒,劉鎖蘭.黃連中小檗堿的定性與定量分析.首都師范大學學報(自然科學版),2008,32(6):325-327.

  5 饒躍峰,謝先吉,趙青威,等.復方止血栓中鹽酸小檗堿的含量測定.中國醫院藥學雜志,2008,27(3):102-103.

  6 付小六.反相高效液相色譜法測定復方黃柏酊中小檗堿含量.中國藥業,2006,14(6):98-99.

  7 庫爾班江,努爾買買提.高效液相色譜法測定紅果小檗皮小檗堿的含量.新疆師范大學學報,2008,28(2):63-64.

  


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