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ELISA一步法對高濃度HBsAg的影響分析

來源:中華現代臨床醫學雜志 作者:賈保林作者單位:830063 新疆烏魯木齊,武警兵團指揮 2013-9-26
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摘要: 【摘要】 目的 探討導致二對半中HBsAg陰性e抗原陽性的原因。方法 收集本院2008年以來體檢和住院病人兩對半結果中HBsAg陰性e抗原陽性的3例標本,用ELISA法雙試劑分一步法和二步法分別測定,并應用 DNA進行確認。結論 對可疑樣本復檢時,不能選擇同一廠家的一步法試劑,避免HooK effect的出現而影響檢測結果。 ......


【摘要】  目的 探討導致二對半中HBsAg陰性e抗原陽性的原因。方法 收集本院2008年以來體檢和住院病人兩對半結果中HBsAg陰性e抗原陽性的3例標本,用ELISA法雙試劑分一步法和二步法分別測定,并應用 DNA進行確認。結果 3例標本中1例陰性,2例陽性。結論 對可疑樣本復檢時,不能選擇同一廠家的一步法試劑,避免HooK effect的出現而影響檢測結果。

【關鍵詞】  表面抗原;e抗原;前帶現象

 酶聯免疫吸附(ELISA)實驗,按其操作步驟分為一步法和二步法;一步法因為操作更簡單而深受廣大用戶的青睞。筆者在常規檢查乙肝五項時,發現3例HBsAg陰性HBeAg單顯陽性的樣本,后經兩步法復檢,DNA確認,1例陰性,2例陽性,證實為ELISA一步法引起的假陰性結果,報告如下。

  1 材料與方法

  1.1 標本來源

  標本采自本院正常體檢者。

  1.2 試劑

  HBsAg試劑盒使用北京金豪公司和上海科華公司,通過國家批批檢。

  1.3 主要儀器

  KHB ST-360酶標儀,KHB ST-36洗板機。

  1.4 方法

  血樣本在常規下用一步法和兩步法分別進行檢測,操作嚴格按試劑說明書進行。

  2 結果

  見表1。表1 3例HBsAg陰性e抗原陽性標本檢測結果

  3 討論

  HBeAg存在于乙肝病毒Danna顆粒的核心部分,HBeAg存在表明HBV處于增殖和復制狀態,具有強烈的傳染性。乙肝兩點半檢測HBeAg陽性較為罕見,文獻報道可能是與INF-a治療中C基因區的短暫整合或s基因序列中a決定簇前有插入性變異有關。從實驗的結果看,一步法在檢測中2例出現了假陰性結果,而兩步法檢測結果呈陽性,這是一種叫做前帶現象(或Hook效應)引起,即在檢測高滴度抗原(抗體)時出現的極低水平陽性和假陰性結果。產生“Hook effect”的原因,多數的研究認為,在檢測高滴度抗原(抗體)時,抗原(抗體)與固相抗體(抗原)反應的比例不當,過剩的抗原(抗體)僅與標記抗體(抗原)結合,而不能與固相抗體(抗原)吸附,洗滌時被洗掉,從而導致僅有少量抗體(抗原)被利用,造成假陰性結果。要改善“HOOK”,最簡單的方法時稀釋高滴度的待測樣本,這無疑將增加工作量,而采用二步法檢測可完全消除“HOOK”效應,降低漏檢率。因此,筆者認為對可疑樣本復檢時,不能選擇同一廠家的一步法試劑,避免HooK effect的出現而影響檢測結果。這樣既避免了假陽性(陰性)結果的出現,又減少了醫療糾紛

【參考文獻】
  1 洪宏,趙枰.ELISA法檢測血清HBsAg前帶現象的探討.檢驗醫學與臨床,2007,(1):39.

  2 何剛,宋本先,董五平.ELISA法檢測HBsAg前帶現象1例.臨床輸血與檢驗,2003,(2):147-148.

  3 毛新友.酶免疫一步法檢測HBsAg前帶現象及其對策.現代檢驗醫學雜志,2003,(2):38.

  4 常立俊.HBeAg酶試荊假陽性原因探討.華美通訊,1999,1(2):21.

  


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