主題:色譜

+ 關注 ≡ 收起全部文章

復方金銀花沖劑的薄層色譜鑒別研究

   【摘要】 目的 研究如何更好地控制復方金銀花沖劑的質量,為制定新的質量標準提供依據。方法 采用適當的提取方法,提取后用薄層色譜法鑒別復方金銀花沖劑中的金銀花、連翹、黃芩3種成分。結果 采用薄層色譜法鑒別的3種供試品色譜中,在與對照藥材色譜相應的位置上,均能顯示相同顏色的斑點。結論 利用薄色譜法可對復方金銀花沖劑的金銀花、連翹、黃芩3種成分進行鑒別。

  關鍵詞 復方金銀花沖劑 薄層色譜法 鑒別 金銀花 連翹 黃芩?

  復方金銀花沖劑收載于《中華人民共和國衛生部藥品標準》中藥成方制劑第10冊。處方由金銀花、連翹、黃芩等3味中藥材組成的復方中藥制劑,具清熱解毒,涼血消腫的功效,原有的質量標準中僅有黃芩薄色譜鑒別項。目前,我國有多家藥廠生產該制劑,因此,完善質量標準,對嚴格控制不同地區、不同廠家的產品質量,更好地為廣大患者服務具有重要意義。筆者采用薄層色譜法對處方中的金銀花、黃芩、連翹進行了鑒別,獲得了滿意的效果。

  1 材料與試劑

  復方金銀花沖劑(吉林修正藥業集團公司生產,批號:020508);綠原酸對照品、金銀花、連翹、黃芩對照藥材(中國藥品生物制品檢定所);硅膠G、硅膠H(青島海洋化工廠);所用試劑均為分析純。薄層板:自制硅膠G-4%NaAc板,硅膠HCMC-2Na薄層板,厚度0.5mm。

  2 方法與結果

  2.1 金銀花、黃芩的薄層色譜鑒別 [1] 取復方金銀花沖劑10g,加丙酮30ml,加熱回流40min,濾過,濾液蒸干,殘渣加丙酮1ml使溶解,作為供試品溶液;分別取金銀花、黃芩對 照藥材2g,另稱取與供試品處方相同比例,但分別除去金銀花、黃芩的處方藥味的陰性對照樣品10g,按供試品溶液制備的方法制成對照藥材溶液和金銀花、黃芩的陰性對照液;再取綠原酸對照品,加甲醇制成1mg/ml的溶液,作為對照品溶液。吸取上述6種溶液各10μl,分別點于同一硅膠HCMC薄層板上,以乙酸丁酯-甲酸-水(70:25:25)為展開劑展開,取出晾干,噴以2%三氯化鐵乙醇液,供試品色譜中,在與金銀花對照藥材液色譜相應位置上顯相同顏色斑點;在與黃芩對照藥材色譜相應位置上顯相同顏色的斑點,陰性對照無相應斑點。見圖1。

  2.2 連翹的薄層色譜鑒別 供試品溶液制法同2.1;另取連翹陰性對照樣品10g,連翹對照藥材2g,同法制成連翹陰性對照液和連翹對照藥材溶液;吸取上述3種溶液各10μl,分別點于同一硅膠G-4%NaAc薄層板上,以醋酸乙酯-丙酮-甲酸-水(50:30:5:10)為展開劑,展開,取出晾干,置氨缸中熏至顯色。供試品色譜在與對照品色譜相應位置上顯相同顏色斑點;在與對照藥材色譜相應位置上顯相同顏色斑點;陰性對照液無相應斑點。見圖2。圖1 金銀花、黃芩的薄層色譜鑒別 圖2 連翹的薄層色譜鑒別

  3 討論

  3.1 本實驗中以硅膠HCMC薄板鑒別金銀花、黃芩時,供試品溶液在與金銀花對照藥材色譜相應位置上顯3個顏色相同的斑點;在與黃芩藥材對照色譜相應的位置上,顯2個相同顏色斑點。而陰性對照液均不顯相應的金銀花和黃芩的主斑點。

  3.2 本實驗中以硅膠G-4%NaAc薄層板鑒別連翹時,供試品溶液在與連翹對照藥材色譜相應位置上顯2個顏色相同的斑點;而陰性對照液不顯相應主斑點。

  3.3 本實驗中均采用了對照藥材及陰性對照試驗,結果表明,各檢出成分不受處方中其它群藥的干擾,方法簡便、快速、專屬性強、重現性好。

  參考文獻

  1 衛生部國家藥典委員會.中國藥典(一部).北京:化學工業出版社,2000,附頁37.?

  作者單位:541200廣西靈川縣農業局、桂林漓江制藥有限公司

日期:2005年8月4日 - 來自[中醫中藥]欄目

高效液相色譜手性固定相法分離布洛芬對映體

    【摘要】 目的  探尋一種簡單經濟而有效的分離布洛芬對映體的方法。 方法  采用在實驗室制備的十四-(2,6-二-O-戊基)-β-CD硅膠鍵合固定相色譜柱(250mm×4.6mm),直接分離布洛芬對映體。考察不同流動相、pH值等因素對布洛芬對映體分離的影響。 結果  分離布洛芬對映體的最佳HPLC條件為:流動相:乙腈:0.05mmol/L、磷酸二氫鉀=50∶50(0∶0),pH=4.0,流速ml/min,進樣體積10μl進樣溫度25℃。 結論  高效液相色譜手性固定相法分離布洛芬對映體快速、簡單、經濟、效果好,可為分離、制備單旋體布洛芬提供良好借鑒。

    【關鍵詞】  高效液相色譜 手性固定相 布洛芬 對映體
  
    Enantiomeric separation of ibuprofen by chiral high performance liquid chromatography

    Ye Weimin,Luo Aiqin,Hou Aijun,et al.

    School of Life Science and Technology,Beijing Institute of Technology,Beijing100081.

    【Abstract】 Chiral stationary high performance liquid chromatography method was developed in enantiomeric separation of ibuprofen.The stationary phase in the column(250mm×4.6mm)was tetradeca-(2,6-dioxyamyl)-β-cyclodextrin bonded with silica.The mobile phase was CH 3 CN and0.05mol/L KH 2 PO 4 (50∶50,V∶V),pH val-ue was adjusted to4.0with phosphoric acid.The different mobile phase and pH value were studied in the separation of ibuprofen enantiomers.

    【Key words】 HPLC chiral stationary phase ibuprofen enantiomer

    布洛芬(Ibuprofen)是常用的非甾體類消炎鎮痛劑 [1,2] ,其化學名為(R,S)-2-(4-異丁基苯基)丙酸,合成產物為外消旋體,研究表明,布洛芬手性對映體的藥效存在很大差別,右旋布洛芬的活性是左旋體的160倍,是消旋布洛芬的1.6倍 [3] 。因此,探尋一種簡單經濟而有效的分離布洛芬對映體的方法具有重要的意義。國內已有一些關于對映體藥物分離方法的報道,但多用間接拆分的衍生化色譜方法,不但過程復雜、操作繁瑣、方法的適用范圍窄,而且在衍生化的過程中容易使對映體互相轉化,或衍生化反應不完全等,從而導致測定結果的不準確 [4~6] 。國外已有用環糊精手性固定相直接測定此類藥物對映體含量的報道 [7] 。但在國內用此類固定相分離布洛芬對映體的方法報道不多。本文采用實驗室合成制備的十四-(2,6-二-O-戊基)-β-CD硅膠鍵合固定相色譜柱,直接分離了布洛芬對映體。該方法操作簡單迅速,分離效果明顯,較之其它方法有明顯的優勢。

    1 實驗部分

    1.1 儀器與試劑 實驗儀器:Waters515-717-996色譜系統,包括515二元泵、717自動進樣器、996二極管陣列檢測器、Milliennium 32 色譜工作站,PHS-3B型精密pH計(上海精密科學儀器有限公司雷磁儀器廠),Hangping FA1004電子天平(上海天平廠),Branson2200超聲清洗器(Branson Ultrason-ics Corporation USA)。實驗試劑:甲醇(Caledon,HPLC),乙腈(Fisher,HPLC),磷酸(北京益利精細化學品有限公司,AR),磷酸二氫鉀(北京化學試劑公司,AR),布洛芬外消旋樣品(北京市藥物檢驗所),超純水(北京理工大學)。

    1.2 色譜柱的選擇 色譜柱規格250mm×4.6mm,填料為十四-(2,6-二-O-戊基)-β-CD鍵合硅膠固定相,β-環糊精衍生化反應如下 [8]

    1.3 檢測波長的選擇 從二極管陣列檢測器的三維掃描圖可以看到,布洛芬在271.4nm處具有最大紫外吸收,根據吸收最大干擾最小的原則,選取271.4nm作為檢測波長。1.4 流動相的選擇 分別用甲醇、乙腈、水、磷酸緩沖鹽的不同組合做先期的探索性實驗,從初步分離色譜圖可以得出:選擇甲醇和緩沖鹽作流動相很難分開布洛芬對映體,且出峰時間長,而在同等條件下選擇乙腈(簡稱A)和0.05mol/L磷酸二氫鉀(簡稱B)則明顯有利于布洛芬對映體的分離。為了進一步確定A與B的最佳組成比例,選取多組不同的混合比例作為對比實驗,圖1表示了A與B不同比例下的分離效果,表1列出了相應的分離參數。

    表1 A與B不同比例下的分離參數(略)

    由圖1和表1可以看出,流動相中乙腈的比例減小,將有利于布洛芬對映體的分離,但分離的保留時間明顯增大,所以綜合考慮選取A∶B=5∶5(V∶V,下同)。pH值影響:在A∶B=5∶5下考察不同pH值的分離情況,如圖2所示,相應的分離因子如圖3所示:圖2和圖3顯示:當A∶B=5∶5時,分離因子α受pH值的影響呈先增大后減小的趨勢。因此,選擇用磷酸調節pH值到4.0作為流動相的pH值環境。

    2 結果與討論

    2.1 最佳HPLC條件 通過考察不同流動相配比、不同pH環境等各種實驗條件,最終得到分離布洛芬對映體的最佳HPLC條件:流動相為乙腈∶0.05mol/L磷酸二氫鉀=5∶5(V∶V),pH=4.0,流速為1.0ml/min,進樣體積10μl,進樣器溫度25℃。在此條件下,布洛芬對映體已經基本分開,主要色譜參數如下:α=1.13,R=1.22,t  r1 =17.87min,t  r2 =19.64min。

    圖1 A與B不同比例下的分離色譜圖
   
    圖2 A∶B=5∶5下不同pH值的分離色譜圖
   
    圖3 在A∶B=5∶5下pH值與分離因子α的關系

    2.2 方法的精密度 準確稱量5.0mg布洛芬對映體樣品,移入5ml容量瓶,加入2.5ml流動相超聲溶解,再用流動相定容,制成儲備液。取1ml儲備液用0.45μm有機濾頭過濾至進樣瓶,進樣量為10μl,在相的條件下連續進樣6次考察布洛芬對映體量的變化。結果見表2,相對標準偏差分別為0.38%和0.33%,表明該實驗系統具有很好的精密度。

    表2 精密度實驗結果(略)

    參考文獻

    1 Veltri JC,Rollins DE.A comparison between the frequency and severity of poisoning case for ingestion of acetaminophen,aspirin and ibuprofen. Am J Emerg Med,1988,6:104.

    2 McElwee NE,et al.A prospepective,population based study of acute ibuprofen overdose:Complication are rare and routine serum levels not warranted.Ann Emerg Med,1990,19:657.

    3 Evans AM,Ear J Clin Pharmacol,1992,42(3):237-256.

    4 Zhao Hua,Mu Zhaode,Li Huizhi et al.China Pharmaceutical Journal,2000,35(3):194-196.

    5 Liu Yanming,Miao Jianrong.Journal of China Pharmaceutical Universi-ty,1999,30(2):124-126.

    6 Xie Yuchun,Liu Huizhou,Chen Jiayong.Chinese Journal of Chromatog- raphy,1998,16(1):56-58.

    7 Healy L O,Murrihy,Tan Aimin,Cocker D,et al.Enantiomeric separa-tion of R,S-naproxen by conventional and nano-liquid chromatogra-phy with methyl-b-cyclodextrin as a mobile phase additive.Journal of Chromatography A,2001,924:459-464.

    8 劉立文.高效液相色譜手性固定相的合成及對映體分離研究,北京:北京理工大學,2004.

    (編輯子 萱)
 
    作者單位:1100081北京理工大學生命科學與技術學院
    中國疾病預防控制中心病毒病預防控制所
    北京市藥品檢驗所

日期:2005年8月4日 - 來自[論著]欄目

高效液相色譜法測定麥冬和紅參中糖的含量

   【摘要】 目的 采用高效液相色譜法測定麥冬、紅參中糖的含量。方法 常用ZorbaxNH2柱(4.6mm×250mm,5μm)為色譜柱,乙晴-水(70∶30)為流動液,流速1.0ml/min,柱溫30℃的色譜條件進行分析。結果 平均加樣回收率為99.81%RSD=3.29%,符合分析要求。重復性實驗的RSD分別為:D-Fru1.10%,D-Glu0.65%。結論 采用HPLC法測定葡萄糖、果糖含量,是一個靈敏、準確、快速的測定方法,可以評價麥冬、紅參及其制劑的質量,指導工藝研究,控制藥品質量。

   關鍵詞 葡萄糖 果糖 麥冬 紅參 HPLC

   紅參、麥冬是參麥凍干粉針的兩味主藥,其主要成分是皂甙類占5.0%~7.0%,糖類占70%~80%,是質量控制的重要指標。紅參、麥冬的多糖具有增強免疫功能等活性,單糖既是紅參、麥冬的活性成分之一,又與皂甙、多糖的組成有關,這兩味藥所含重要單糖有:葡萄糖、果糖、麥芽糖、半乳糖等 [1] ,其中葡萄糖、果糖是紅參、麥冬及參麥凍干粉針中均含有的兩種主要單糖,因此,采用HPLC法測定葡萄糖、果糖含量,準確、快速、重現性好,是質量標準研究的主要檢測項目,可以指導工藝研究,控制藥品質量。

   1 儀器與試藥

   美國惠普HP1100高效液相色譜儀;G2170AAPC化學工作站;G1362A示差折光檢測器(RID);As5150A超聲波清洗 器(天津奧特賽恩斯公司);AZ-200型電子天平(天津、METTLER);對照品:D-果糖(D-Fructose)、D-葡萄糖(D-Glucose anhydrous)由中國藥品生物制品檢定所提供。藥材:紅參(吉林長白山)、麥冬(四川綿陽);供試品:麥冬水溶液,紅參總皂甙均為本室制備;甲醇、乙晴均為色譜純,水為二次重蒸水。

   2 方法與結果

   2.1 色譜條件 色譜柱:Zorbax NH2柱(4.6mm×250mm,5μm);流動相:乙晴-水(70∶30);流速:1.0ml/min;柱溫:30℃,進樣量:20μl。外標法。保留時間:D-Fru為7.73min,D-Glu為8.74min。對照品、樣品、陰性樣品色譜圖見圖1。圖1 紅參、麥冬HPLC色譜圖注:a.對照品 b.麥冬樣品 c.紅參樣品 d.陰性樣品 1.果糖D-Fru 2.葡萄糖D-Glu 2.1.1 對照品溶液:精密稱定D-果糖4.0mg,D-葡萄糖6.7mg,用乙晴-水(80∶20)溶解,定容于5ml容量瓶中,配成濃度為0.80μg/μl的D-Fru和1.34μg/μl的D-Glu對照品液。

   2.1.2 供試品溶液 ①麥冬:取麥冬水溶液(1∶1)1.0ml,加于D101大孔樹脂柱中(Φ0.5×10cm),用蒸餾水洗脫,收集洗脫液100ml,水浴上濃縮、定容至50ml,臨床用前用0.4μm濾膜過濾。②紅參:稱取紅參總皂甙提取物41.90mg,用適量蒸餾水溶解,加于D101大孔樹脂柱中(Φ0.5×10cm),用蒸餾水洗脫,收集洗脫液50ml,置水浴上濃縮定容至10ml。濾過。

   2.2 測定方法 精密吸取上述供試品溶液各20μl,注入高效液相色譜儀,量取峰面積,以外標法計算樣品含量。

   2.3 標準曲線制備 精密吸取對照品溶液4,6,8,10,12,14μl,注入高效液相色譜儀中,每個點重復進樣3針,按上述色譜條件測定峰面積,取平均值。以峰面積為縱坐標,濃度C(μg/μl)為橫坐標,繪制標準曲線,回歸統計,結果如下。D-果糖的線性回歸方程為:Y=9.4760×10 3 X-8.5622×10 3 ;相關系數γ=0.9992D-Fru在3.20~11.20μg范圍內呈線性關系。D-葡萄糖的線性回歸方程為:Y=8.7538×10 3 X-1.2603×10 3 ;相關系數γ=0.9997D-Glu在5.36~18.76μg范圍內,呈線性關系。其中: X為對照品的濃度,Y為對照品的峰面積。

   2.4 穩定性考察 取供試品溶液分別為0,2,4,6,8h進樣,測得峰面積的RSD為0.63%,表明樣品溶液在8h內穩定。

   2.5 精密度實驗 取供試樣品溶液20μl,注入色譜儀,連續進樣5次,測得D-Fru和D-Glu的峰面積的RSD分別為0.76%和0.40%,表明進樣精密度良好。

   2.6 重現性實驗 取5份紅參總皂甙提取物樣品,按“2.1.2”項下方法制備供試品,各取20μl進樣,測含量。D-Fru和D-Glu含量的RSD分別為1.10%和0.65%,表明重現性好。

   2.7 加樣回收率實驗 取已知含量的麥冬水溶液樣品5 份,分別加入一定量的葡萄糖對照品,再分別加入D101大孔樹脂中(Φ0.5×10cm),用蒸餾水洗脫,收集洗脫液100ml,置水浴上濃縮,定容至50ml。臨用前用針筒式濾膜濾過,取20μl進樣,測含量。見表1。表1 加樣回收率實驗結果樣品(略)?

   2.8 樣品含量測定結果 按“2.1.2”項下方法制備供試品,取20μl進樣,測定結果見表2、表3。表2 紅參總皂甙提取物中糖的含量 (略)

   3 討論

   3.1 紅參總皂甙總提取物、麥冬水溶液為配制參麥凍干粉針的中間體,其糖的含量對成品的成型及質量有重要影響,因此需要檢測。

   3.2 糖類在紫外光區基本無吸收,無法用紫外檢測器檢測,而在示差中有較強吸收,因此選用示差折光檢測儀。色譜柱經C18柱與NH2柱比較,NH2柱分離效果好,選用 [2,3] 。

   3.3 樣品前處理采用醋酸鉛沉淀和大孔樹脂分離兩種方法,經實驗比較,發現醋酸鉛處理后,雜質不易除凈,雜質峰較多,干擾大,而大孔樹脂分離方法,凈化效果好,雜質峰幾乎無,故選用大孔樹脂分離作前處理方法。

   3.4 從測定結果可看出,紅參總皂甙中Glu與Fru相差不多,而在麥冬中Fru是Glu的10倍量。

   3.5 采用高效液相色譜測定紅參、麥冬中糖的含量,回收率、線性、精密度均符合分析要求,方法準確、簡便、快速、重現性好。

   參考文獻

   1 苗明三,李振國.現代實用中藥控制技術,北京:人民衛生出版社,2000,482.

   2 王桂有.含丹參葡萄糖注射液中葡萄糖含量測定方法研究.現代中藥研究與實踐,2003,17(5):44.

   3 崔秀明.三七糖類成分的含量及其量化.現代中藥研究與實踐,2003,增刊,21.

日期:2005年8月4日 - 來自[中醫中藥]欄目

色譜儀器檢定標準

 

  色譜儀檢定的特點
  A) 檢定時間長
  檢定一臺色譜儀一般需要3-5個小時,時間較長。色譜儀在運行前首先要進行1-2小時的預熱,否則儀器的基線難以穩定。另外在在檢定過程中,基線和重復性的檢定也都需要較長的時間。
  B) 儀器型號繁多、操作復雜
  色譜儀在運行前,需要更換色譜柱、流動相,啟動泵和檢測器,并對衰減、流速、紙速等進行設置,所以操作比較復雜。另外,色譜儀的型號比較多,各種型號色譜儀的操作界面都不盡相同,尤其是計算機工作站的引入,使得各種型號色譜儀的操作差別更大。
  C) 維修困難
  色譜儀的內部電路非常復雜,而且零部件的更換必須使用相應廠家生產的配套產品,因而維修比較困難。
  D) 標準物質是主要的計量裝置
  不論是氣相色譜儀,還是液相色譜儀,基線噪聲、基線漂移、最小檢測濃度都是三個最重要的指標,而對它們的檢定只需使用標準物質即可進行
  E) 分布不均衡
  色譜儀檢定的方法
  1、液相色譜儀
  實驗室液相色譜儀是由輸液系統、進樣器、色譜柱、檢測器和數據記錄處理裝置等幾部分組成的分析儀器。圖3是典型的液相色譜儀組成方框圖。它利用樣品中各組分在色譜柱中固定相和流動相間分配系數或吸附系數的差異,將各組分分離后進行檢測,并根據各組分的保留時間和響應值進行定性、定量分析。
  主要檢定項目:
  泵流量設定值誤差SS、流量穩定性誤差SR
  檢定輸液系統
  定性、定量重復性
  最小檢測濃度、基線噪聲、基線漂移
  關于最小檢測濃度的檢定,規程規定“在靜態條件下,用注射器注入標準物質”然后用最小檢測限公式計算,得出結論(所謂靜態條件,即在不開泵的情況下,把樣品直接注入樣品池)。但由于近年來液相色譜儀結構設計有了較大的改變,尤其是計算機工作站的引入,使它的超作方式更為簡化。因而,原來規程所規定的檢測方法已不在適用。對于它的檢定應在動態條件下(即正常的開機進樣情況),注入20ΜL標準物質,然后用最小檢測限公式進行計算。若儀器的進樣筏小于20ΜL應把測得的峰高換算成20ΜL時的峰高(20ΜL/進樣筏容量*所測峰高)。以上測量方法與即將出版的液相色譜儀新檢定規程上的方法是相同的。
  至于基線噪聲和基線漂移按照規程所規定的條件對儀器進行設定后,使儀器空走半小時即可在色譜圖中讀出。單位AU是一個紫外吸收的單位,一般它與單位MV是相對應的,如果儀器色譜圖上顯示的單位是MV,可以通過查找儀器說明書找到換算關系。
  檢定原理:依據JJG705-90《實驗室液相色譜儀計量檢定規程》。
  檢定周期:兩年
  2、氣相色譜儀
  氣相色譜儀是根據試樣中各組分在氣固或氣液兩相間的吸附或分配系數的不同隨載氣移動而進行分離的儀器。分離后的組分按保留時間的先后順序進入檢測器,并自動記錄檢測信號,依據組分的保留時間和響應值進行定性、定量分析。氣相色譜儀由氣源、氣路控制系統、進樣系統、色譜柱、檢測器、電氣系統、記錄及處理系統組成。
  主要檢定項目:載氣流速穩定性、柱箱溫度穩定性、基線噪聲、基線漂移、靈敏度、檢測限
  檢定原理:依據JJG700-1999《氣相色譜儀計量檢定規程》。
  檢定周期:2年

 

日期:2005年8月4日 - 來自[中藥研究與新藥申報]欄目

液相色譜柱使用及保養

 

  液相色譜儀由高壓液體泵、檢測器及液相色譜柱等三部分組成,其中液相色譜柱的正確安裝和使用,是液相色譜工作的關鍵;也是液相色譜工作者獲得正確可靠的實驗數據的必經之路。
  一、液相色譜柱的安裝:
  1、液相色譜柱的結構:
  a、空柱由柱接頭、柱管及濾片組裝而成。
  柱接頭采用低死體積結構,柱接頭是兩端螺紋組件,一端是為7/16英寸外螺紋,另一端是3/16英寸的內螺紋(國內外已規范化)。7/16英寸外螺紋與1/4英寸柱管(Φ6.35mm)連接,中間放置壓壞用于密封。3/16英寸的內螺紋與1/16英寸(Φ1.57mm)的連接管連接,中間也放置壓環用于柱接頭的密封。為了盡量減少柱外死體積,在安裝色譜柱時,用Φ1.57mm連接管通過空心螺釘壓環后要盡量插到底,然后再擰緊空心螺釘。壓環被空心螺釘擠壓變形后緊箍在連接管上(連接管通過壓環后露出的管長度應嚴格控制在2.5mm長或其他固定尺寸)。
  在兩端柱接頭內,柱管兩端各放置一片不銹鋼濾片(或濾網),用于封堵柱填料不被流動相沖出柱外而流失。空柱各組件均為316#不銹鋼材質,能耐受一般的溶劑作用。但由于含氯化物的溶劑對其有一定的腐蝕性,故使用時要注意,柱及連接管內不能長時間存留此類溶劑,以避免腐蝕。
  b、柱填料:
  液相色譜柱的分離作用是在填料與流動相之間進行的,柱子的分類是依據填料類型而定。
  正相柱:多以硅膠為柱填料。根據外型可分為無定型和球型兩種,其顆粒直徑在3—10
  μm的范圍內。另一類正相填料是硅膠表面鍵合—CN,-NH2等官能團即所謂的鍵合相硅膠。
  反相柱:主要是以硅膠為基質,在其表面鍵合十八烷基官能團(ODS)的非極性填料。也有無定型和球型之分。
  常用的其他的反相填料還有鍵合C8、C4、C2、苯基等,其顆粒粒徑在3—10 μm之間。
  2,色譜柱的安裝:
  a、拆開柱包裝盒,確認色譜柱的類型、尺寸、出廠日期以及柱內貯存的溶劑。
  b、擰下柱兩端接頭的密封堵頭放回包裝盒供備用。
  c、 按柱管上標示的流動相流向,將色譜柱的入口端通過連接管與進樣閥出口相連接(如條件允許,建議在柱前使用保護柱);柱的出口與檢測器連接。連接管是外徑為1.57mm、內徑為0.1-0.3mm的不銹鋼管。連接管的兩端均有空心螺釘及密封用壓環。在接管時一定要設法降低柱外死體積。連接管通過空心螺釘、壓環后盡量用力插到底,然后順時針擰緊空心螺釘,直到擰不動為止,再用扳手繼續順時針擰1/4-1/2圈,切記不要用力過大。如色譜柱通過流動相加壓后有漏液現象,請用扳手繼續順時針擰1/4圈,直至不漏液為止。
  二、液相色譜柱的使用:
  色譜柱在使用前,最好進行柱的性能測試,并將結果保存起來,作為今后評價柱性能變化的參考。但要注意:柱性能可能由于所使用的樣品、流動相、柱溫等條件的差異而有所不同;另外,在做柱性能測試時是按照色譜柱出廠報告中的條件進行(出廠測試所使用的條件是最佳條件),只有這樣,測得的結果才有可比性。
  1、樣品的前處理:
  a、最好使用流動相溶解樣品。
  b、使用予處理柱除去樣品中的強極性或與柱填料產生不可逆吸附的雜質。
  c、使用0.45μm的過濾膜過濾除去微粒雜質。
  2、流動相的配制:
  液相色譜是樣品組分在柱填料與流動相之間質量交換而達到分離的目的,因此要求流動相具備以下的特點:
  a、流動相對樣品具有一定的溶解能力,保證樣品組分不會沉淀在柱中(或長時間保留在柱中)。
  b、流動相具有一定惰性,與樣品不產生化學反應(特殊情況除外)。
  c、流動相的黏度要盡量小,以便在使用較長的分析柱時能得到好的分離效果;同時降低柱壓降,延長液體泵的使用壽命(可運用提高溫度的方法降低流動相的黏度)。
  d、流動相的物化性質要與使用的檢測器相適應。如使用UV檢測器,最好使用對紫外吸收較低的溶劑配制。
  e、流動相沸點不要太低,否則容易產生氣泡,導致實驗無法進行。
  f、在流動相配制好后,一定要進行脫氣。除去溶解在流動相中的微量氣體既有利于檢測,還可以防止流動相中的微量氧與樣品發生作用。
  3、流動相流速的選擇:
  因柱效是柱中流動相線性流速的函數,使用不同的流速可得到不同的柱效。對于一根特定的色譜柱,要追求最佳柱效,最好使用最佳流速。對內徑為4.6mm的色譜柱,流速一般選擇1ml/min,對于內徑為4.0mm柱,流速0.8ml/min為佳。
  當選用最佳流速時,分析時間可能延長。可采用改變流動相的洗滌強度的方法以縮短分析時間(如使用反相柱時,可適當增加甲醇或乙腈的含量)。
  注意:
  a.由于甲醇廉價,對于反相柱推薦使用甲醇體系(必須使用乙腈的場合除外)。
  b.對于正相柱推薦使用沸程為30-60℃的石油醚或提純后的己烷作流動相,沒有提純的己烷不得使用。用水最好使用超純水(電阻率大于18兆歐),去離子水及雙蒸水中含有酚類雜質,有可能影響分析結果。
  c.含水流動相最奸在實驗前配制,尤其是夏天使用緩沖溶液作為流動相不要過夜。最好加入疊氮化鈉,防止細菌生長。
  d.流動相要求使用0.45 μm濾膜過濾,除去微粒雜質。
  e.使用HPLC級溶劑配制流動相,使用合適的流動相可延長色譜柱的使用壽命,提高柱性能。
  4、柱性能測試:
  啟動液相色譜儀:a、流動相流速設定為1ml/min。
  b、UV檢測器波長設定為254nm。
  使用出廠測試時使用的流動相組成及測試樣品。
  記錄并計算測試結果。

 

日期:2005年8月4日 - 來自[中藥指紋圖譜]欄目

高效液相色譜 HPLC 在中藥質量控制中的應用

  【摘要】 為了更好地制定中藥現代化的質量標準,探討高效液相色譜(HPLC)在中藥質量控制中的應用,發現HPLC在中藥質量控制中正發揮著積極作用,其樣品提取,色譜條件選擇等都有獨特的特點;并且發現正相高效液相色譜,反相高效液相色譜等多種色譜在中藥質量控制中發揮著不同作用。 

  關鍵詞 HPLC 中藥質量
     
  由于國際知識產權,藥品專利的保護,復關等一系列經濟、政治因素,中藥走向世界面臨新的機遇和挑戰
。一方面,由于氣候、環境、社會、飲食等因素的影響,疾病譜發生了很大的變化,加之藥源性疾病、營養性疾病、老年人疾病的增加,而化學藥物療效的欠佳或影響;某些藥物的毒副作用與耐藥性表現很突出,人們在“回歸大自然”的熱浪下,掀起了“中醫中藥熱”。另一方面由于中藥成份復雜,缺乏明確的有效成份含量標準和制藥標準等原因,使中藥一直沒有得到合法地位。中藥產品多以保健品、增補劑或食物添加劑等在市場流通,中醫藥在新的熱浪沖擊下,如何面對嚴峻的挑戰。求生存、求發展,參與國際競爭是國人應該引起重視的研究課題 [1]  。

    建立與現代化科學技術相適應的中藥質量控制方法,是實現中藥生產現代化非常關鍵的一環,多年以來,在這方面已對它們進行了大量的工作,并已取得明顯的成績,但至今仍有不少中藥沒有質量控制方法或方法不夠理想。近年來HPLC分析法發展很快,應用日益普遍,它具有靈敏度高,分離效率高,易于操作和重復性好等特點,是對中藥進行成分分析的一種極有價值的分析技術。在中藥成分的含量測定、物種鑒別、藥材加工炮制、采收和儲存等方面已有大量的工作報道,因此成為中藥質量控制的重要手段之一。如今HPLC在中藥質量控制方面,正處于全面開花階段,大量文獻爭先報道,除了正相色譜外,反相色譜也得到廣泛應用,并且出現了離子對高效液相色譜、智能多柱高效液相色譜和絡合高效液相色譜的應用。

    1 高效液相色譜在中藥質量控制中的應用

    高效液相色譜在中藥研究方面,早期主要用于中藥化合物化學成分的分析。例如1978年賀賢國等從中華五味子中分離得到五味子甲、五味子乙、五味子丙,解決了薄層層析檢查只有一個斑點,但藥理實驗毒性不穩定的問題 [2]  。1983年張紅、賀賢國等對早期HPLC在中藥研究中的應用作了一定的概述 [3]  。

    由于HPLC具有適用范圍廣,分離效率高,流動相和分析柱使用方式及填料選擇方便等特點,與其它傳統的分析分離手段和儀器檢測相比具有突出的優越性。使HPLC在中藥質量控制方面出現了繁榮景象。1999年1月~10月有關文獻報道達100多篇,并引起許多大型研究機構的關注。中國醫學科學院、協和醫科大學藥物研究所與日本大正制藥株式會社合作開展了中藥高效液相色譜分析與質量評價的系列研究,完成了80個中草藥的高效液相色譜分析及質量考查工作 [4]  。為HPLC在中藥的質量控制發揮積極作用提供了依據,開拓了廣闊空間。

  在《中國藥典》中,HPLC在質量控制中也發揮越來越重要的作用,表1是高效液相色譜在歷版藥典中的應用 [5]  。

  表1 HPLC在歷版藥典中含量測量方法的統計比較 略

  其中在中藥應用方面相對落后,1995版《中國藥典》中398個中藥制劑中僅有小兒消炎栓、護肝片、愈風定心片等少數品種應用HPLC [6]  ,但在2000年版藥典中,明顯增大了HPLC的應用力度。有92個中藥品種利用HPLC測定含量,其中藥材47個,中藥制劑45個。

    HPLC在中藥質量控制中主要用于有效成份含量測定。其常用程序和方法如下:

  (1)試樣的提取:藥材及中藥制劑在測定前應根據其劑型和待測成分的理化性質,選擇適當的溶劑和提取方法,將待測成分從劑型中提取出來。①方劑:小丸和沖劑研成細粉;藥材粉末,散劑直接取樣,準確稱取適量,選擇適當溶媒。常用甲醇或乙醇,浸泡一定時間,超聲波振蕩后提取或加熱回流提取。②口服液:常用有機溶媒萃取,或者取適量口服液拌入適量硅藻土,混勻,干燥后用超聲波振蕩提取或索氏提取。③蜜丸:先剪碎,稱取一定量,拌入適量硅藻土研勻,干燥,再根據待測成分選擇適當溶劑提取。

    (2)試樣純化:①過大孔樹脂柱,可除去糖的干擾。②用聚酰胺柱純化黃酮類成分。③生物堿類,先調pH值至堿性,再用氯仿提取。④過氧化鋁和活性炭混合柱,可除去試樣中少量雜質及色素。⑤用濾膜過濾或過PT系列色譜預處理小粒。

    (3)色譜條件的選擇:①色譜柱:常用YWK、YBK、C18。②流動相:常用甲醇-水、甲醇-水-冰醋酸、甲醇-正已烷等。③檢測器:多為紫外檢測器,根據組分的吸收度,選擇最佳波長。

    (4)定量方法:定量方法為內標法和外標法,由于中藥制劑成分復雜,出峰多且密,故多采用外標法。以試樣的標準品作對照物質,相對比較以求得試樣的含量,常用工作曲線法和外標一點法。

    2 反相高效液相色譜法在中藥質量控制中的應用

    反相高效液相色譜法是HPLC應用最廣的一個分支。反相鍵合相色譜,又稱極性鍵合相色譜。鍵合相表面都是極性很小的烴基,如十八烷基硅烷鍵合硅膠(ODS或C18)而洗脫液大多采用強極性溶劑或無機鹽緩沖液。在這種鍵合相色譜中,洗脫順序恰好與正相色譜相反,即極性大的化合物先洗脫,極性小的化合物不易洗脫。因為鍵合相表面的官能團不易流失,溶劑的極性可以很大范圍內調整,因此應用范圍很寬,加之由其派生的反相離子對色譜法與離子抑制色譜法,可以分離有機酸、堿和鹽等離子化合物,擴大應用范圍 [7]  。近年來反相高效液相色譜在中藥質量控制方面得到廣泛應用。考查1998~1999年100篇HPLC應用于中藥含量測定的文章中有29個用的是反相高效液相色譜。反相高效液相色譜柱:常用C18柱,柱長15~30cm,填料粒度5~10μm。流動相:甲醇-水,乙腈-水,甲醇-磷酸鹽,乙腈-硫酸鹽。可適當調節組分的配比和流動相的pH,個別流動相中添加離子對試劑。檢測器多為紫外檢測器。定量方法有內標法和外標法。

    3 其它高效液相色譜在中藥質量控制中的應用

    3.1 智能多柱高效液相色譜 智能多柱高效液相色譜是在多柱切換高效液相色譜及智能化技術的基礎上提出的新概念,根據分析樣品成分繁多、性質復雜等特點,利用切換技術的模塊或分離性能,把樣品分塊地切換進不同性質的色譜柱,再用合適的流動相洗脫。全過程采用智能化控制。智能多柱高效液相色譜可以較好地解決中藥成分復雜,難以全面掌握其他成分,特別是有效成分而不便于控制其質量的問題,是中藥質量控制較全面和先進的技術 [8]  。

    3.2 絡合高效液相色譜 絡合高效液相色譜是通過形成絡合物,利用HPLC來分離和測定無機物的方法,絡合高效液相色譜具有靈敏度高,選擇性好,能多元同時測定,并可進行價態分開法分析等特點 [9]  。中藥及中藥制劑中含有大量微元素與重金屬,一方面這些微量元素參與了藥物的作用,是中藥發揮獨特療效不可或缺的一部分;另一方面,由于有害重金屬的存在,增加了中藥的毒副作用,影響了中藥的國際化進程。絡合高效液相色譜在這方面的有益探索具有積極作用。

    中藥質量控制是中藥生產現代化的重要環節之一,是中藥走向世界的重要保證,HPLC在此方面正發揮積極作用。但我們也要看到由于中藥成分復雜,作用機制復雜,單純測定幾個指標并不能完全解決問題。如何發揮HPLC的優越性,不斷提高中藥質量有待進一步的研究。

    4 高效液相色譜在中藥質量控制中的應用部分實例

  4.1 藥材 洋金花(東莨菪堿) [10]  。

    4.2 口服液 清熱解毒口服液(黃芩甙) [11]  ,蛇膽川貝液(膽酸) [12]  。

    4.3 注射液粉針劑 丹參粉針劑(丹參素) [13]  ,雷公藤(雷公藤甲素) [14]  。

    4.4 片劑 復方黃連素片(鹽酸小檗堿) [15]  ,三七片(人參 皂甙Rg) [16]  。

    4.5 丸劑 開胸順氣丸(橙皮苷) [17]  。

  4.6 沖劑 胃脘舒沖劑(甘草酸) [18]  。

    4.7 膠囊 天舒膠囊(天麻素) [19]  ,胃利膠囊(橙皮苷) [20]  。

  參考文獻

    1 潘旭初.面向21世紀中藥新藥的研究與開發.時珍國藥研究,1998,9(1):5.

    2 賀賢國.植物學報,1978,20(1):77.

    3 張仁斌.高效液相色譜在醫藥研究中的應用,上海:上海科技出版社,1983,1.

    4 中國醫學科學院.常用中草藥高效液相色譜分析.北京:科學出版社,1999.

    5 李珍.從歷版中國藥典分析方法的統計與研究看我國藥物分析方法的發展.藥物分析雜志,1998,18(5):349.

  6 《中國藥典》95年版.

    7 楊軍.反相高效液相色譜在中藥質量控制中的應用.時珍國藥研究,1998,9(2):126.

    8 趙芝蘭.智能多柱高效液相色譜系統及其在中藥質量控制中的作用.藥學實踐雜志,1998,16(2):97.

    9 李華斌.絡合高效液相色譜法及應用.中國衛生檢驗雜志,1998,8(2):123.

    10 何靜.HPLC測洋金花藥材中東莨菪堿含量.藥物分析雜志,1999,19(3):174.

    11 竇英.HPLC測清熱解毒口服液中黃芩甙含量.中醫藥信息,1999,16(3):57.

    12 倪坤儀.RP-HPLC測蛇膽川貝液中膽酸含量.藥物分析雜志,1993,13(1):3.

    13 關大衛.反相高效液相色譜法測丹素粉針劑中丹參素含量.藥物分析雜志,1994,14(30):36.

    14 胡永勝.高效液相色譜梯度法測雷公藤制劑中雷公藤甲素的含量.色譜,1999,17(3):265.

    15 何興官.HPLC測復方黃連素片中鹽酸小檗堿的含量.華西藥學雜志,1999,14(2):123.

    16 任世才.RP-HPLC法測三七片中人參皂甙Rg含量.中成藥,1996,18(4):14.

    17 林翠英.反相HPCL測定開胸川靈氣丸中橙皮甙的含量.天津藥學,1999,11(1):64.

    18 朱蘭.高效液相測定胃脘舒沖劑中甘草酸的含量.中草藥,1999,30(5):339.

    19 劉金德.HPLC測天舒膠囊中天麻素含量.時珍國醫藥,1999,10(4):246.

    20 王曉風.高效液相色譜測定胃利膠囊中橙皮苷的含量.藥物分析雜志,1999,19(3):190.    

  作者單位:516500廣東廣州解放軍廣州軍區藥檢所   

    (收稿日期:2004-03-19)

    (編輯日 強) 

日期:2005年8月3日 - 來自[綜述]欄目

銀杏葉提取液及注射劑的微乳薄層色譜分析法研究

  【摘要】 目的  研究建立銀杏葉提取液及注射劑的微乳薄層色譜分析法。 方法  采用微乳液薄層色譜展開,照相 數字圖像軟件獲取輪廓積分圖,及CAMAG薄層色譜掃描儀積分2種方法分析結果。 結果  與有機展開劑相比,微乳展開劑獲得的色譜斑點不擴展,分離效果顯著提高。數字圖像軟件獲得的色譜輪廓與薄層色譜掃描儀獲得的輪廓基本一致。 結論  銀杏葉的微乳薄層色譜分離度好,能提供較多的化學信息,能反映銀杏葉原料與制劑間的關系,方法穩定,可作為銀杏葉注射劑質量控制中指紋圖譜建立的參考方法。

  【關鍵詞】  銀杏葉 微乳 TLCS 指紋圖譜

   Study of microemulsion TLC detection of ginkgoleaves extractand injection solution

   Liu Zhen,Liang Bing,Zhao Zhigang,et al.

  Chemical School,Sichuan University,Chengdu610065.

  【Abstract】 Objective To built a microemulsion-TLC detection method for Ginkgoleaves extract and injec-tion.Methods We used microemulsion as an eluent on a polyamide film,took photos of TLC by a digital camera,then got chromatographicprofiles by a digital-imaging software,and scanned the developed TLC film by CAMAGTLC3scanner.Results Compared with a general mobile phase,a microemulsion improved obviously separation efficacy.Chromatographic profiles obtained by a digital imaging software were much similar to those obtained by CAMAG TLC3scanner.Conclusion The microemulsion TLC of Ginkgoleaves could reveal the relation between the herb and its in-jection,with good separation and reliability,gave reference to the construction of fingerprint in quality control.

  【Key words】 ginkgoleaves microemulsion TLC fingerprint

  薄層色譜的展開劑多為有機溶劑,而微乳液作為新的展開劑,分離效果好,斑點多而清晰、不拖尾、Rf大于0.8的組分斑點不擴散,Rf小于0.2的組分仍能清楚辨認 [1] 。微乳液還能增強斑點的熒光強度,提高靈敏度。已應用于氨基酸 [1] 及黃酮類成分分析 [2] 。


     經典的薄層色譜靠目視進行半定量分析,或刮下斑點,用溶劑溶出組分,再作定量測定,操作繁瑣,誤差大。薄層掃描色譜解決了上述問題,定量的準確度、精密度明顯提高。但專業薄層掃描色譜儀昂貴,國內還未能普及。而性能良好、價廉的辦公掃描儀和數碼相機,結合數字圖像技術,就可解決平面圖像的數字化。我們基于數字圖像技術、開發了利用辦公掃描儀或數碼相機進行平面色譜定性、定量分析的數字圖像軟件 [3] ,已為實際應用證明 [4~6] ;改進后的軟件 [7,8] 還能進行中藥平面色譜指紋圖譜相似度的計算與評價、點陣圖像測定。


  銀杏葉提取物具有擴張血管,增加血流量,改善微循環,清除自由基,拮抗血小板活化因子的作用。目前報導的銀杏葉注射劑指紋圖譜均采用HPLC方法,未見薄層色譜指紋圖譜的報導。本文研究建立銀杏葉及其注射劑的微乳薄層色譜分析法,探討其應用于指紋圖譜的可能性,考察使用數字圖像軟件與CAMAG薄層色譜掃描儀所得掃描結果的吻合程度。

  1 儀器和藥品

  層析缸(25×20cm 2 );ZF—Ⅱ型四用紫外分析儀(上海顧村電光儀器廠);KQ2200B型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司);微量進樣器(上海醫用激光儀器廠);色譜用聚酰胺薄膜(臺州四青生化材料廠);OLYMPUS-X-200數碼相機,300萬像素;CAMAG TLC SCANNER3薄層色譜掃描儀;銀杏葉注射劑(黑龍江珍寶島制藥有限公司);蘆丁(中國藥品生物制品檢定所);十二烷基磺酸鈉(SDS),分析純;所用溶劑均為分析純。

  2 方法

  2.1 供試品的制備 銀杏葉提取液供試液:參照文獻 [9] ,1g銀杏葉粉末,用50%乙醇10ml室溫下超聲浴提取2h,定量濾紙過濾后備用。銀杏葉注射劑供試液:取銀杏葉注射劑加甲醇適量備用。

  2.2 對照品溶液制備 TLC蘆丁對照溶液(1mg/ml)制備:用萬分之一電子天平精密稱取10mg蘆丁標準對照品,以甲醇溶解,10ml容量瓶定容。

  2.3 薄層色譜實驗

  2.3.1 微乳液展開劑的配制 按SDS、正丁醇、正庚烷的質量比為3.9∶5.2∶0.9稱取各種試劑共10g,混合后加30g水攪拌溶解,靜置24h制得微乳液,再加體積百分比8%的甲酸配成展開劑。

  2.3.2 點樣及展開 用微量注射器將2μl銀杏葉提取液、2μl注射劑供試液及1μl蘆丁對照溶液帶狀點樣于聚酰胺薄膜上,用微乳展開劑展開8cm,1%AlCl 3 顯色、晾干。

  2.3.3 獲取積分輪廓 參照中藥注射劑指紋圖譜研究的技術指南(試行),在365nm紫外燈下用300萬像素數碼相機照相,用積分軟件獲得熒光色譜輪廓圖;或用CAMAG TLC SCANNER3掃描儀獲取色譜輪廓,365nm檢測波長,熒光方式,反射式直線掃描,狹縫寬5mm。

  3 結果與討論

  3.1 流動相的選擇 對文獻報導的硅膠,傳統有機展開劑的薄層色譜方法作優化,最多僅得到6個斑點。以微乳液作流動相在聚酰胺薄膜上展開,經優化最多獲得了15個斑點。分離效果顯著提高,斑點清晰集中,不拖尾。微乳液展開劑揮發性小,不需預飽和。微乳液結構與含水量有關。含10%和30%水時,形成水/油(W/O)型微乳液;含50%水時,為W/O型和油/水(O/W)型的混合物;含水70%以上時,為O/W型結構 [10] 。加入甲酸可改變展開劑的酸度及極性,試驗了含水15%~90%的微乳液中分別加入體積比5%、8%、10%、15%的甲酸,發現含水75%的微乳液加入8%甲酸配成的展開劑所得的色譜展開斑點清晰集中。故選取含水75%的微乳液加入8%甲酸為展開劑。

  3.2 斑點積分輪廓方法比較 銀杏葉提取液熒光色譜積分輪廓如圖1所示,CAMAG薄層掃描儀掃描得到15個峰(曲線a),其中11號峰為蘆丁,7號峰為肩峰;軟件積分所得輪廓(曲線b)及峰數與CAMAG的基本一致、僅7號肩峰未顯現。銀杏葉注射液熒光色譜積分輪廓如圖2,CAMAG掃描儀掃描得到13個峰(曲線a),其中9號峰為蘆丁;數字圖像軟件積分所得輪廓(曲線b)及峰數與CAMAG的非常接近,僅6號肩峰未顯現、13號峰極弱。銀杏葉提取液色譜包括了注射液所有峰,注射劑在Rf0.08和0.23處的峰比提取液弱,說明銀杏葉藥材與制劑間的相關性。與薄層掃描儀相比,軟件法的分辨率和靈敏度略低,可能是因紫外燈單色性及強度有限。但軟件法更便捷,所需設備廉價。改善燈性能便可能提高分辨率和靈敏度(圖3)。

  3.3 共有峰信息 選取分離清晰,峰高穩定的峰作為銀杏葉藥材和注射劑的共有峰10個(如圖4)。以參照物蘆丁的峰高作為1,以CAMAG掃描儀積分結果計算各共有峰的相對峰高,結果如表1。表1 銀杏葉藥材、注射劑共有峰參數   
   
  3.4 方法學考察 在10℃、15℃及20℃下色譜展開,所得結果各峰Rf值相一致,表明本法對溫度穩定。銀杏葉提取液和注射液供試液各在同一張薄膜上點6個樣,熒光色譜用薄層色譜掃描儀積分,所得峰的Rf值及峰高RSD<5%。銀杏葉提取液和注射液供試液各在6張薄膜上點樣,用薄層色譜掃描儀積分所得峰的Rf值及峰高RSD<5%。取銀杏葉同法6次制備提取液供試液,其熒光色譜用薄層色譜掃描儀積分所得峰的Rf值及峰高RSD<5%。本實驗未能收集到不同批次的藥材和制劑作評價,僅作為方法學討論。本方法分離效率、精密度和穩定性良好,可作為建立指紋圖譜的方法參考。(本文圖片見附頁1)

  參考文獻

  1 田大聽.一種新的展開劑用于氨基酸的薄層色譜分析.色譜,2003,21(1):91.

  2 康純.微乳薄層色譜用于黃酮類成分分離鑒定的研究.藥物分析雜志,2000,20(2):121.

    3 何瑾.辦公用掃描儀在分析化學中應用的基礎研究.四川大學學報,2003,35(2):68.

  4 雷永誠.薄層色譜法在制備光學戊醇中的應用.化學研究與應用,2004,16(4):545.

  5 毛雪華.含朱砂中成藥中鋅、鎘、鈷、鎳的薄層掃描色譜.西南民族學院學報自然科學版,2004,(3):299.

  6 毛雪華.含朱砂中成藥中汞、銅的薄層掃描色譜測定.四川化工,2004,(2):41.

  7 敬小麗.數字圖像處理技術在平面色譜中應用的研究.西南民族學院學報自然科學版,2004,(3):295.

    8 梁冰.數字化圖像處理技術在平面色譜及芯片檢測中應用的研究.中國現代應用藥學,2004,21(7):6.

  9 游松.銀杏葉注射劑指紋圖譜的研究.中草藥,2002,33(3):216.

  10 梁淑芳.山楂黃酮的薄層色譜分離鑒定研究.林產化學與工業,2003,23(4):86.


  作者單位:610065四川大學化工學院(通訊作者)

  610041西南民族大學化學與環境保護工程學院

日期:2005年8月3日 - 來自[論著]欄目

撫心卻郁丹的制備及臨床應用

    大凡失眠多夢心煩急躁,焦慮不安,驚恐多疑,幻聽幻視等精神和行為障礙等癥,多因肝氣郁結,五志化火,灼傷心陰,陰傷則心火熾,腎精虧耗,久之則上擾心神所致,我們參考文獻,經過反復篩選,自制了撫心卻郁丹,經臨床應用,療效滿意,現介紹如下。

  1 處方及制備

  1.1 處方 西洋參18g,蓮子心18g,益智仁28g,山茱萸18g,鹿銜草14g,黃芪(炙)60g,黃連28g,淡竹葉28g,白芍28g,龍骨(煅)30g,山楂120g,啤酒花28g,共制成100粒。

  1.2 制備 以上諸味藥,取西洋參、白芍粉碎過120目篩,其他10味藥置多功能提取罐中,加8倍量、6倍量、4倍量水分別煎煮2h,1.5h,1h,合并3次煎液,減壓濃縮至相對密度1.2(40℃),加乙醇使醇含量達到60%,攪勻,靜置24h,取上清液,回收乙醇至無醇味,減壓濃縮噴霧干燥,取浸膏粉、西洋參等細粉、適量淀粉制粒干燥,制得100g分裝0 # 膠囊,每粒0.5g即得。

  2 質量標準

  2.1 性狀 本品為黃棕色的顆粒,味微苦。

  2.2 鑒別 (1)取本品1g,加乙醇30ml,振搖5min,放置,濾過,濾液蒸干,殘渣加水20ml溶解,加乙醚提取至乙醚層無色,棄去乙醚,再用水飽和的正丁醇提取3次,每次20ml,合并正丁醇液以正丁醇飽和的水洗3次,每次15ml,棄去水層、蒸干,殘渣加0.5ml乙醇使溶解,作為供試品。另取芍藥苷對照品,加乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液,作為對照溶液,再取白芍對照藥材0.5g,加乙醇10ml,振搖5min,濾過濾液蒸干,殘渣加乙醇1ml使溶解,作為對照藥材溶液。照薄層色譜法(中國藥典2000版一部附錄ⅥB)試驗,吸取供試品溶液及對照藥材溶液各5~10μl,對照溶液10μl,分別點于同一硅膠G薄層板上,以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-甲酸(40∶5∶10∶0.5)為展開劑,展開,取出,晾干,噴以5%香草醛硫酸溶液,加熱至斑點顯色清晰,供試品色譜中,在與對照品色譜及對照藥材色譜相應的位置上,顯相同顏色的斑點。(2)取本品1g,加甲醇30ml加熱回流30min,濾過濾液蒸干,加甲醇溶解并稀釋成5ml作為供試溶液,另取鹽酸小檗堿對照品,加甲醇制成每1ml含0.04mg的溶液,作為對照品溶液,再取黃連對照藥材0.5g加甲醇10ml,加熱,回流30min,濾過,濾液蒸干,加甲醇使溶解并稀釋成5ml,作為對照溶液,照薄層色譜法(中國藥典2000版一部附錄ⅥB)試驗,吸取供試品溶液6,對照品溶液及對照藥材溶液各4μl,分別點于同一硅膠G薄板上,苯-醋酸乙酯-異丙醇-甲醇-氨水(6∶3:1.5∶1.5∶0.5)為展開劑,置預先以氨蒸氣飽和的層析缸中,展開,取出,晾干,置紫外燈(365nm)下檢視。供試品色譜中,在與對照品色譜及對照藥材色譜相應的位置上,顯相同顏色的熒光斑點。(3)取本品2g,加甲醇50ml,加熱回流1h,濾過,濾液蒸干,殘渣加水使溶解,用乙醚振搖提取2次,每次10ml,棄去乙醚液,用水飽和的正丁醇提取3次,每次15ml,合并正丁醇液,用正丁醇飽和的水洗滌2次,每次10ml,分取正丁醇液,蒸干,加甲醇1ml使溶解,作為供試溶液,另取西洋參對照藥材1g,同上法制成對照藥材溶液,再取人參皂苷Rb1對照品,加甲醇制成每1ml含1g的溶液,作為對照溶液,照薄層色譜法(中國藥典2000版一部附錄ⅥB)試驗,吸取對照品溶液與對照藥材溶液各3μl,供試品溶液6μl,分別點于同一硅膠G薄層板上,以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水(15∶40∶22∶15)5~10℃放置12h的下層溶液為展開劑,展開取出,晾干,噴以10%的硫酸乙醇溶液,加熱至斑點顯色清晰,供試品色譜中,在與對照品色譜及對照藥材色譜相應的位置上,顯相同顏色的斑點。(4)檢查:應符合硬膠囊項下有關的各項規定(中國藥典2000年版一部附錄IC)。

  3 臨床應用

  用法用量:開水沖服,1次2粒,1日3次,2周為1個療程。(1)臨床療效觀察指標及判斷標準:以單盲法,治療前后自身療效對照,不設對照組,觀察63例有失眠多夢、急躁,焦慮不安、驚恐多疑,幻聽幻視等精神和行為障礙等癥的患者服用本制劑1個療程后,進行隨訪觀察,以上述癥狀為觀察療效指標,顯效:各癥狀患者用藥后癥狀完全消失。有效:患者用藥后癥狀明顯得以緩解和改善。無效:患者用藥前后癥狀無變化,或改變不明顯。(2)治療結果:顯效17例(27.0%),有效40例(63.5%),總有效57例,總有效率90.5%,無效6例(9.5%)。

  4 討論

  方中西洋參養陰生津,蓮子心清心寧神為君,益智仁、山茱萸、鹿銜草、黃芪、黃連、淡竹葉清火養陰為臣,白芍、龍骨化痰瘀,斂汗固精為佐,山楂、啤酒花,消導健脾,以防諸藥礙胃使,諸藥相伍,共奏清心火,養心陰,除心煩,和脾胃,固腎精,補中益氣之功效,治療失眠、心煩、耳鳴、神疲乏力,健忘多夢、不思飲食等癥。參考文獻1 中國藥典編委會.中國藥典,北京:化學工業出版社,2000,一部. 2 中國醫學科學院藥物研究所.中藥志(第三冊),北京:人民衛生出版社,1984,57.

  作者單位:737100甘肅省金昌市第二人民醫院

日期:2005年8月2日 - 來自[藥物臨床]欄目
共 227 頁,當前第 217 頁 9 212 213 214 215 216 217 218 219 220 221 222 :


關閉

網站地圖 | RSS訂閱 | 圖文 | 版權說明 | 友情鏈接
Copyright © 2008 39kf.com All rights reserved. 醫源世界 版權所有 蘇ICP備12067730號-1
醫源世界所刊載之內容一般僅用于教育目的。您從醫源世界獲取的信息不得直接用于診斷、治療疾病或應對您的健康問題。如果您懷疑自己有健康問題,請直接咨詢您的保健醫生。醫源世界、作者、編輯都將不負任何責任和義務。
本站內容來源于網絡,轉載僅為傳播信息促進醫藥行業發展,如果我們的行為侵犯了您的權益,請及時與我們聯系我們將在收到通知后妥善處理該部分內容
聯系Email: