主題:色譜

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降糖類中成藥中違法添加化學藥的檢定技術研究

    隨著“回歸自然”健身保健的呼聲越來越高,中藥在藥品市場占有的份額越來越大,中國人傳統的用藥習慣是“西藥治標,中藥治本”西藥副作用大,中藥副作用小,一些不法分子、不法企業在利益的驅使下,為了迎合國人對中藥的信賴,利用化學藥顯效快、作用迅速的特點,在純中藥制劑中擅自添加化學成分,并隨意夸大療效,以贏得醫生和患者的信任,高價銷售牟取暴利,而我國的現行標準又不能對此現象進行有效的控制,本項目針對當前藥品制假、售假的現象,為了更有效地打擊這種非法行為,對降糖類中成藥違法添加化學藥進行了廣泛的研究。我們采用TLC法和HPLC法對降糖類中成藥進行檢測,在43批降糖寧膠囊、降糖膠囊、糖尿樂膠囊、玉液消渴顆粒等產品中檢出化學藥格列本脲。

    1 儀器、試劑與樣品

    1.1 儀器 美國產單泵高效液相色譜儀(泵SSI-300、檢測器SSI-500)美國產雙泵高效液相色譜儀(泵SERIESⅣ、檢測器SSI-Mode1500)

    1.2 試劑及試藥 硅膠GF 254 (青島海洋化工有限公司)、氯仿、磷酸、磷酸二氫銨、環己烷、乙醇、冰醋酸均為分析純,甲醇為色譜純,重蒸水。格列本脲(中國生物制品檢定所10135-0103)。

    1.3 樣品 糖尿樂膠囊、降糖寧膠囊、降糖膠囊、降糖舒膠囊、糖脈康顆粒、參芪降糖膠囊、玉液消渴顆粒等均為市售品。對照樣品:按質量標準規定的處方、工藝制備。

    2 實驗方法

    2.1 薄層色譜法

    2.1.1 供試品溶液的制備 根據格列本脲在氯仿中略溶;在甲醇或乙醇中微溶;在水或乙醚中不溶的理化性質作如下提取:(1)取供試品3~5粒(一次服用量),加氯仿25ml,振搖30min,過濾,濾液蒸干,殘渣加氯仿1ml溶解作為供試品溶液。(2)取供試品3~5粒(一次服用量),加格列本脲對照品2.5mg,再加氯仿25ml,以下同(1)。

    2.1.2 對照品溶液的制備 取格列本脲對照品制成每毫升中含1.5mg的溶液作為對照品溶液。

    2.1.3 空白溶液的制備 分別取上述降糖藥(一次服用量),按方法(1)實驗,得空白溶液。

    2.1.4 檢測方法 取供試品溶液、對照品溶液和空白溶液各5μl,分別點于同一硅膠GF 254 薄層板上,以氯仿-環己烷-乙醇-冰醋酸(8∶13∶1∶1)為展開劑,展開,取出,晾干,置紫外燈(254nm)下檢視。

    2.1.5 薄層色譜圖說明 在所實驗的43批樣品中,有11個批次的供試品色譜圖在對照品色譜圖相應的位置上,檢出大小及顏色相近的斑點。空白溶液在與對照品色譜圖相應的位置上,沒有檢出斑點。說明各處方沒有造成假陽性的干擾成分。

    2.1.6 靈敏度實驗 取格列本脲對照品制成每毫升含0.05mg、0.08mg、0.10mg、0.12mg、0.15mg、0.20mg、0.25mg的溶液,供試品各取5μl,分別點于同一硅膠GF 254 薄層板上,以氯仿-環己烷-乙醇-冰醋酸(8∶13∶1∶1)為展開劑,展開,取出,晾干,置紫外燈(254nm)下檢視。結果0.08mg/ml以上濃度的供試液檢出相應大小和顏色的斑點。

    2.1.7 檢出成分的再確認 以薄層掃描法對上述檢出的成分的斑點掃描,再與對照品斑點的掃描圖譜相比較做進一步的確認,結果證明被檢出的成分是格列本脲。

    2.2 高效液相色譜法 色譜柱:(1)lunaC-185μm250mm×4.6mm;(2)Dikma TechigiesC-185μm250mm×4.6mm;流動相甲醇-磷酸二氫銨(取磷酸二氫銨1.725g,加水300ml溶解,用磷酸調pH至3.5±0.5(5∶3),檢測波長274nm。

    2.2.1 供試品溶液的制備 取供試品一次服用量,分別加甲醇12ml,超聲處理使溶解,加流動相稀至刻度,搖勻,濾過,濾液作為供試品溶液。

    2.2.2 對照品溶液的制備 精取格列本脲對照品約20mg,加甲醇12ml,超聲處理使溶解,加流動相稀至刻度,搖勻,作為對照品溶液。

    2.2.3 空白溶液的制備 分別取上述降糖藥(一次服用量),按供試品溶液制備方法,得空白溶液。

    2.2.4 色譜圖的檢測 分別取供試品溶液、對照品溶液、空白溶液各20μl,分別注入高效液相色譜儀,記錄色譜圖。結果有11個批次的供試品色譜圖在對照品色譜圖相應的位置上,檢出色譜峰。空白溶液在與對照品色譜圖相應的位置上,沒有檢出色譜峰。與薄層色譜的結果相一致。

    2.2.5 靈敏度實驗 取格列本脲對照品照對照品溶液制備方法制成每毫升含格列本脲0.01mg、0.025mg、0.05mg、0.10mg、0.15mg、0.20mg、0.25mg的溶液,各取20μl,分別注入高效液相色譜儀,記錄色譜圖。結果最低檢出限為0.05mg/ml。

    3 結論

    薄層色譜法快速、靈敏、簡便,能較完全地提出格列本脲,經過氯仿-環己烷-乙醇-冰醋酸(8∶13∶1∶1)展開劑的展開,待檢成分與其他成分分離完全,斑點清晰,降糖寧膠囊、降糖膠囊、糖尿樂膠囊中每粒含250μg的格列本脲即可檢出。高效液相色譜法在薄層色譜法基礎上進一步提高了檢測的靈敏度。上述鑒定方法簡便、快速、靈敏度高。是降糖類中成藥中違法添加化學藥格列本脲的有效檢測手段。

    (編輯田 雨)

    作者單位:124010遼寧省盤錦市藥品檢驗所 

日期:2005年9月21日 - 來自[藥物與臨床]欄目

感速康膠囊鑒別方法研究

  感速康膠囊為衛生部藥品標準收載的品種(標準號:WS 2 -B-3985-98-2002),由金銀花、大青葉、山豆根、對乙酰氨基酚、馬來酸氯苯那敏、維生素C等六味藥組成,具有清熱解毒,消炎止痛的功效。適用于風熱感冒,流行性感冒及上呼吸道感染引起的頭痛身痛,鼻塞流涕,咳嗽痰黃,咽喉腫痛,齒齦腫痛等病癥。由于其療效確切,深受廣大患者的歡迎,但原標準上只收載了三味西藥的理化鑒別,為了進一步控制該制劑的質量,我們對方中六味藥建立了薄層色譜鑒別方法,方法簡便靈敏,重現性好。

  1 實驗儀品與材料

  感速康膠囊(吉林瀧源制藥有限責任公司,批號:0305011);陰性對照品(由成都中醫藥大學中化教研室提供);對照藥材及對照品:金銀花對照藥材、靛玉紅、山豆根對照藥材、對乙酰氨基酚對照品、馬來酸氯苯那敏對照品、維生素C對照品(中國藥品生物制品檢定所提供);硅膠G(青島海洋化工廠);試劑:均為AR級;超聲波清洗器(DL-360中國寧波)。

  2 鑒別

  2.1 金銀花的薄層鑒別 取本品2粒,傾出內容物,加水10m1溶解,并用稀鹽酸調pH至4,離心,取上清液加到已處理好的聚酰胺小柱(柱內徑約1.1cm,聚酰胺lg,40~60目)上,用水洗至中性,再用丙酮20m1洗脫,收集洗脫液,蒸干,殘渣加甲醇1m1使溶解,作為供試品溶液。另取綠原酸對照品,加甲醇制成1m1含1mg的溶液,作為對照品溶液。吸取供試品溶液4μ1,對照藥材溶液2μ1,分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層板上,以氯仿-甲酸 -丙酮(10:2.5:2.5)為展開劑,展開,取出,晾干,在紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中,在與對照品色譜相應的位置上,顯相同顏色的斑點。按處方取不含金銀花的其它藥材,照本品制備工藝和供試品溶液的制備方法制成陰性對照,經多批樣品實驗觀察,該項鑒別重現性好,陰性對照無干擾(見圖1)。
   
  2.2 對乙酰氨基酚鑒別 取本品1粒,置50ml三角瓶中,加乙醇20ml,超聲處理5min,濾過,濾液作為供試品溶液。同法制備不含對乙酰氨基酚的陰性樣品溶液。另取對乙酰氯基酚對照品,加乙醇制成每1ml含1mg的溶液,作為對照品溶液。照薄層色譜法 [1]  (中國藥典2000年版一部附錄ⅥB)試驗,吸取上述兩種溶液各2μl,分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠GF254薄層板上,以氯仿-甲醇-濃氨試液(5:3:1)為展開劑,展至約10cm,取出,晾干,置紫外光燈(254nm)下檢視。供試品色譜中,在與對照品色譜相應的位置上,顯相同顏色的熒光斑點,陰性樣品無干擾(見圖2)。

  2.3 大青葉的薄層鑒別 [2]   取本品10粒,加氯仿20ml、回流提取1h,濾過,濾液蒸干,殘渣加氯仿1ml使溶解,作為供試品溶液。同法制備不含對大青葉的陰性樣品溶液另取靛玉紅對照品,加氯仿制成每1ml含1mg的溶液,作為對照品溶液。照薄層色譜法試驗,吸取上述兩種溶液各5μl,分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層板上,以苯-氯仿-丙酮(5:4:1)為展開劑,展開,取出,晾干。供試品色譜中,在與對照品色譜相應的位置上,顯相同淺紫紅色斑點,陰性樣品無干擾(見圖3)。

    2.4 馬來酸氯苯那敏的薄層鑒別 [3]   取本品10粒,加氯仿20ml,超聲處理5min,濾過,濾液濃縮至1ml,作為供試品溶液。同法制備不含對馬來酸氯苯那敏的陰性樣品溶液。另取馬來酸氯苯那敏對照品,加氯仿制成每1ml含1mg的溶液,作為對照品溶液。照薄層色譜法試驗,吸取上述兩種溶液各4μl,分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層板上,以醋酸乙酯-甲醇(8:0.5)為展開劑,濃氨水飽和0min,展開,取出,晾干,噴以稀碘化鉍鉀試液。供試品色譜中,在與對照品色譜相應的位置上,顯相同黃色斑點,陰性樣品無干擾(見圖4)。
  
  2.5 山豆根的薄層鑒別 [4]   取本品10粒,加濃氨試液5ml,浸漬1h,加氯仿20ml,超聲處理30min,濾過,分取氯仿層,濃縮成1ml,作為供試品溶液。同法制備不含對山豆根的陰性樣品溶液。另取山豆根對照藥材1g,同法制成對照藥    材溶液。照薄層色譜法試驗,吸取對照藥材溶液,供試品溶 液各8μl分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層板上,以氯仿-甲醇-濃氨(4:1:0.1)為展開劑,展開,
取出,晾干,噴以稀碘化鉍鉀試液。供試品色譜中,在與對照品色譜相應的位置上,顯相同的橙黃色斑點,陰性樣品在相應位置無干擾(見圖5)。

    2.6 維生素C薄層鑒別 取本品2粒,加乙醇20ml,超聲處理10min,濾過,濾液濃縮至1ml,作為供試品溶液。同法制備不含對維生素C的陰性樣品溶液。另取維生素C對照品,加甲醇制成每1ml含1mg的溶液,作為對照品溶液。照薄層色譜法試驗,吸取對照品溶液,供試品溶液各2μl分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠GF254薄層板上,以氯仿-甲酸(9:1)為展開劑,展開,取出,晾干,置紫外光燈(254nm)下檢視。供試品色譜中,在與對照品色譜相應的位置上,顯相同顏色的熒光斑點,陰性樣品無干擾(見圖6)。

  3 討論

    3.1 金銀花的薄層色譜鑒別曾用醋酸乙酯提取后,甲醇定容點樣,由于提取液中干擾成分多,經薄層分離,結果樣品分成一條色帶,綠原酸斑點被色帶干擾,本方法改用聚酞胺小柱進行預處理,經多次反復實驗,綠原酸斑點經分離清晰可見。

    3.2 在原標準的基礎上增加了方中六味藥的薄層鑒別,大    大的提高了制劑的標準,可以更好的控制該制劑的質量。

  參考文獻

  1 藥典編輯委員會.中華人民共和國藥典(一、二部),北京:化學工業出版社,2000,279-291.

    2 呂武清.清肝利膽膠囊劑質量標準研究.中國藥品標準,2002,3(4):212.

    3 黃諾嘉.撲感片質量標準的研究.中成藥,2001,23(4):255-257.4 宋茹.山豆根合劑的質量標準研究.時珍國醫國藥,2001,12(8):58. 

  (收稿日期:2004-05-16) (編輯子 萱)

  作者單位:611730成都中醫藥大學

日期:2005年9月21日 - 來自[藥物]欄目

復方金銀花沖劑的薄層色譜鑒別研究

   【摘要】 目的 研究如何更好地控制復方金銀花沖劑的質量,為制定新的質量標準提供依據。方法 采用適當的提取方法,提取后用薄層色譜法鑒別復方金銀花沖劑中的金銀花、連翹、黃芩3種成分。結果 采用薄層色譜法鑒別的3種供試品色譜中,在與對照藥材色譜相應的位置上,均能顯示相同顏色的斑點。結論 利用薄色譜法可對復方金銀花沖劑的金銀花、連翹、黃芩3種成分進行鑒別。

  關鍵詞 復方金銀花沖劑 薄層色譜法 鑒別 金銀花 連翹 黃芩?

  復方金銀花沖劑收載于《中華人民共和國衛生部藥品標準》中藥成方制劑第10冊。處方由金銀花、連翹、黃芩等3味中藥材組成的復方中藥制劑,具清熱解毒,涼血消腫的功效,原有的質量標準中僅有黃芩薄色譜鑒別項。目前,我國有多家藥廠生產該制劑,因此,完善質量標準,對嚴格控制不同地區、不同廠家的產品質量,更好地為廣大患者服務具有重要意義。筆者采用薄層色譜法對處方中的金銀花、黃芩、連翹進行了鑒別,獲得了滿意的效果。

  1 材料與試劑

  復方金銀花沖劑(吉林修正藥業集團公司生產,批號:020508);綠原酸對照品、金銀花、連翹、黃芩對照藥材(中國藥品生物制品檢定所);硅膠G、硅膠H(青島海洋化工廠);所用試劑均為分析純。薄層板:自制硅膠G-4%NaAc板,硅膠HCMC-2Na薄層板,厚度0.5mm。

  2 方法與結果

  2.1 金銀花、黃芩的薄層色譜鑒別 [1] 取復方金銀花沖劑10g,加丙酮30ml,加熱回流40min,濾過,濾液蒸干,殘渣加丙酮1ml使溶解,作為供試品溶液;分別取金銀花、黃芩對 照藥材2g,另稱取與供試品處方相同比例,但分別除去金銀花、黃芩的處方藥味的陰性對照樣品10g,按供試品溶液制備的方法制成對照藥材溶液和金銀花、黃芩的陰性對照液;再取綠原酸對照品,加甲醇制成1mg/ml的溶液,作為對照品溶液。吸取上述6種溶液各10μl,分別點于同一硅膠HCMC薄層板上,以乙酸丁酯-甲酸-水(70:25:25)為展開劑展開,取出晾干,噴以2%三氯化鐵乙醇液,供試品色譜中,在與金銀花對照藥材液色譜相應位置上顯相同顏色斑點;在與黃芩對照藥材色譜相應位置上顯相同顏色的斑點,陰性對照無相應斑點。見圖1。

  2.2 連翹的薄層色譜鑒別 供試品溶液制法同2.1;另取連翹陰性對照樣品10g,連翹對照藥材2g,同法制成連翹陰性對照液和連翹對照藥材溶液;吸取上述3種溶液各10μl,分別點于同一硅膠G-4%NaAc薄層板上,以醋酸乙酯-丙酮-甲酸-水(50:30:5:10)為展開劑,展開,取出晾干,置氨缸中熏至顯色。供試品色譜在與對照品色譜相應位置上顯相同顏色斑點;在與對照藥材色譜相應位置上顯相同顏色斑點;陰性對照液無相應斑點。見圖2。圖1 金銀花、黃芩的薄層色譜鑒別 圖2 連翹的薄層色譜鑒別

  3 討論

  3.1 本實驗中以硅膠HCMC薄板鑒別金銀花、黃芩時,供試品溶液在與金銀花對照藥材色譜相應位置上顯3個顏色相同的斑點;在與黃芩藥材對照色譜相應的位置上,顯2個相同顏色斑點。而陰性對照液均不顯相應的金銀花和黃芩的主斑點。

  3.2 本實驗中以硅膠G-4%NaAc薄層板鑒別連翹時,供試品溶液在與連翹對照藥材色譜相應位置上顯2個顏色相同的斑點;而陰性對照液不顯相應主斑點。

  3.3 本實驗中均采用了對照藥材及陰性對照試驗,結果表明,各檢出成分不受處方中其它群藥的干擾,方法簡便、快速、專屬性強、重現性好。

  參考文獻

  1 衛生部國家藥典委員會.中國藥典(一部).北京:化學工業出版社,2000,附頁37.?

  作者單位:541200廣西靈川縣農業局、桂林漓江制藥有限公司

日期:2005年8月4日 - 來自[中醫中藥]欄目

高效液相色譜手性固定相法分離布洛芬對映體

    【摘要】 目的  探尋一種簡單經濟而有效的分離布洛芬對映體的方法。 方法  采用在實驗室制備的十四-(2,6-二-O-戊基)-β-CD硅膠鍵合固定相色譜柱(250mm×4.6mm),直接分離布洛芬對映體。考察不同流動相、pH值等因素對布洛芬對映體分離的影響。 結果  分離布洛芬對映體的最佳HPLC條件為:流動相:乙腈:0.05mmol/L、磷酸二氫鉀=50∶50(0∶0),pH=4.0,流速ml/min,進樣體積10μl進樣溫度25℃。 結論  高效液相色譜手性固定相法分離布洛芬對映體快速、簡單、經濟、效果好,可為分離、制備單旋體布洛芬提供良好借鑒。

    【關鍵詞】  高效液相色譜 手性固定相 布洛芬 對映體
  
    Enantiomeric separation of ibuprofen by chiral high performance liquid chromatography

    Ye Weimin,Luo Aiqin,Hou Aijun,et al.

    School of Life Science and Technology,Beijing Institute of Technology,Beijing100081.

    【Abstract】 Chiral stationary high performance liquid chromatography method was developed in enantiomeric separation of ibuprofen.The stationary phase in the column(250mm×4.6mm)was tetradeca-(2,6-dioxyamyl)-β-cyclodextrin bonded with silica.The mobile phase was CH 3 CN and0.05mol/L KH 2 PO 4 (50∶50,V∶V),pH val-ue was adjusted to4.0with phosphoric acid.The different mobile phase and pH value were studied in the separation of ibuprofen enantiomers.

    【Key words】 HPLC chiral stationary phase ibuprofen enantiomer

    布洛芬(Ibuprofen)是常用的非甾體類消炎鎮痛劑 [1,2] ,其化學名為(R,S)-2-(4-異丁基苯基)丙酸,合成產物為外消旋體,研究表明,布洛芬手性對映體的藥效存在很大差別,右旋布洛芬的活性是左旋體的160倍,是消旋布洛芬的1.6倍 [3] 。因此,探尋一種簡單經濟而有效的分離布洛芬對映體的方法具有重要的意義。國內已有一些關于對映體藥物分離方法的報道,但多用間接拆分的衍生化色譜方法,不但過程復雜、操作繁瑣、方法的適用范圍窄,而且在衍生化的過程中容易使對映體互相轉化,或衍生化反應不完全等,從而導致測定結果的不準確 [4~6] 。國外已有用環糊精手性固定相直接測定此類藥物對映體含量的報道 [7] 。但在國內用此類固定相分離布洛芬對映體的方法報道不多。本文采用實驗室合成制備的十四-(2,6-二-O-戊基)-β-CD硅膠鍵合固定相色譜柱,直接分離了布洛芬對映體。該方法操作簡單迅速,分離效果明顯,較之其它方法有明顯的優勢。

    1 實驗部分

    1.1 儀器與試劑 實驗儀器:Waters515-717-996色譜系統,包括515二元泵、717自動進樣器、996二極管陣列檢測器、Milliennium 32 色譜工作站,PHS-3B型精密pH計(上海精密科學儀器有限公司雷磁儀器廠),Hangping FA1004電子天平(上海天平廠),Branson2200超聲清洗器(Branson Ultrason-ics Corporation USA)。實驗試劑:甲醇(Caledon,HPLC),乙腈(Fisher,HPLC),磷酸(北京益利精細化學品有限公司,AR),磷酸二氫鉀(北京化學試劑公司,AR),布洛芬外消旋樣品(北京市藥物檢驗所),超純水(北京理工大學)。

    1.2 色譜柱的選擇 色譜柱規格250mm×4.6mm,填料為十四-(2,6-二-O-戊基)-β-CD鍵合硅膠固定相,β-環糊精衍生化反應如下 [8]

    1.3 檢測波長的選擇 從二極管陣列檢測器的三維掃描圖可以看到,布洛芬在271.4nm處具有最大紫外吸收,根據吸收最大干擾最小的原則,選取271.4nm作為檢測波長。1.4 流動相的選擇 分別用甲醇、乙腈、水、磷酸緩沖鹽的不同組合做先期的探索性實驗,從初步分離色譜圖可以得出:選擇甲醇和緩沖鹽作流動相很難分開布洛芬對映體,且出峰時間長,而在同等條件下選擇乙腈(簡稱A)和0.05mol/L磷酸二氫鉀(簡稱B)則明顯有利于布洛芬對映體的分離。為了進一步確定A與B的最佳組成比例,選取多組不同的混合比例作為對比實驗,圖1表示了A與B不同比例下的分離效果,表1列出了相應的分離參數。

    表1 A與B不同比例下的分離參數(略)

    由圖1和表1可以看出,流動相中乙腈的比例減小,將有利于布洛芬對映體的分離,但分離的保留時間明顯增大,所以綜合考慮選取A∶B=5∶5(V∶V,下同)。pH值影響:在A∶B=5∶5下考察不同pH值的分離情況,如圖2所示,相應的分離因子如圖3所示:圖2和圖3顯示:當A∶B=5∶5時,分離因子α受pH值的影響呈先增大后減小的趨勢。因此,選擇用磷酸調節pH值到4.0作為流動相的pH值環境。

    2 結果與討論

    2.1 最佳HPLC條件 通過考察不同流動相配比、不同pH環境等各種實驗條件,最終得到分離布洛芬對映體的最佳HPLC條件:流動相為乙腈∶0.05mol/L磷酸二氫鉀=5∶5(V∶V),pH=4.0,流速為1.0ml/min,進樣體積10μl,進樣器溫度25℃。在此條件下,布洛芬對映體已經基本分開,主要色譜參數如下:α=1.13,R=1.22,t  r1 =17.87min,t  r2 =19.64min。

    圖1 A與B不同比例下的分離色譜圖
   
    圖2 A∶B=5∶5下不同pH值的分離色譜圖
   
    圖3 在A∶B=5∶5下pH值與分離因子α的關系

    2.2 方法的精密度 準確稱量5.0mg布洛芬對映體樣品,移入5ml容量瓶,加入2.5ml流動相超聲溶解,再用流動相定容,制成儲備液。取1ml儲備液用0.45μm有機濾頭過濾至進樣瓶,進樣量為10μl,在相的條件下連續進樣6次考察布洛芬對映體量的變化。結果見表2,相對標準偏差分別為0.38%和0.33%,表明該實驗系統具有很好的精密度。

    表2 精密度實驗結果(略)

    參考文獻

    1 Veltri JC,Rollins DE.A comparison between the frequency and severity of poisoning case for ingestion of acetaminophen,aspirin and ibuprofen. Am J Emerg Med,1988,6:104.

    2 McElwee NE,et al.A prospepective,population based study of acute ibuprofen overdose:Complication are rare and routine serum levels not warranted.Ann Emerg Med,1990,19:657.

    3 Evans AM,Ear J Clin Pharmacol,1992,42(3):237-256.

    4 Zhao Hua,Mu Zhaode,Li Huizhi et al.China Pharmaceutical Journal,2000,35(3):194-196.

    5 Liu Yanming,Miao Jianrong.Journal of China Pharmaceutical Universi-ty,1999,30(2):124-126.

    6 Xie Yuchun,Liu Huizhou,Chen Jiayong.Chinese Journal of Chromatog- raphy,1998,16(1):56-58.

    7 Healy L O,Murrihy,Tan Aimin,Cocker D,et al.Enantiomeric separa-tion of R,S-naproxen by conventional and nano-liquid chromatogra-phy with methyl-b-cyclodextrin as a mobile phase additive.Journal of Chromatography A,2001,924:459-464.

    8 劉立文.高效液相色譜手性固定相的合成及對映體分離研究,北京:北京理工大學,2004.

    (編輯子 萱)
 
    作者單位:1100081北京理工大學生命科學與技術學院
    中國疾病預防控制中心病毒病預防控制所
    北京市藥品檢驗所

日期:2005年8月4日 - 來自[論著]欄目

高效液相色譜法測定麥冬和紅參中糖的含量

   【摘要】 目的 采用高效液相色譜法測定麥冬、紅參中糖的含量。方法 常用ZorbaxNH2柱(4.6mm×250mm,5μm)為色譜柱,乙晴-水(70∶30)為流動液,流速1.0ml/min,柱溫30℃的色譜條件進行分析。結果 平均加樣回收率為99.81%RSD=3.29%,符合分析要求。重復性實驗的RSD分別為:D-Fru1.10%,D-Glu0.65%。結論 采用HPLC法測定葡萄糖、果糖含量,是一個靈敏、準確、快速的測定方法,可以評價麥冬、紅參及其制劑的質量,指導工藝研究,控制藥品質量。

   關鍵詞 葡萄糖 果糖 麥冬 紅參 HPLC

   紅參、麥冬是參麥凍干粉針的兩味主藥,其主要成分是皂甙類占5.0%~7.0%,糖類占70%~80%,是質量控制的重要指標。紅參、麥冬的多糖具有增強免疫功能等活性,單糖既是紅參、麥冬的活性成分之一,又與皂甙、多糖的組成有關,這兩味藥所含重要單糖有:葡萄糖、果糖、麥芽糖、半乳糖等 [1] ,其中葡萄糖、果糖是紅參、麥冬及參麥凍干粉針中均含有的兩種主要單糖,因此,采用HPLC法測定葡萄糖、果糖含量,準確、快速、重現性好,是質量標準研究的主要檢測項目,可以指導工藝研究,控制藥品質量。

   1 儀器與試藥

   美國惠普HP1100高效液相色譜儀;G2170AAPC化學工作站;G1362A示差折光檢測器(RID);As5150A超聲波清洗 器(天津奧特賽恩斯公司);AZ-200型電子天平(天津、METTLER);對照品:D-果糖(D-Fructose)、D-葡萄糖(D-Glucose anhydrous)由中國藥品生物制品檢定所提供。藥材:紅參(吉林長白山)、麥冬(四川綿陽);供試品:麥冬水溶液,紅參總皂甙均為本室制備;甲醇、乙晴均為色譜純,水為二次重蒸水。

   2 方法與結果

   2.1 色譜條件 色譜柱:Zorbax NH2柱(4.6mm×250mm,5μm);流動相:乙晴-水(70∶30);流速:1.0ml/min;柱溫:30℃,進樣量:20μl。外標法。保留時間:D-Fru為7.73min,D-Glu為8.74min。對照品、樣品、陰性樣品色譜圖見圖1。圖1 紅參、麥冬HPLC色譜圖注:a.對照品 b.麥冬樣品 c.紅參樣品 d.陰性樣品 1.果糖D-Fru 2.葡萄糖D-Glu 2.1.1 對照品溶液:精密稱定D-果糖4.0mg,D-葡萄糖6.7mg,用乙晴-水(80∶20)溶解,定容于5ml容量瓶中,配成濃度為0.80μg/μl的D-Fru和1.34μg/μl的D-Glu對照品液。

   2.1.2 供試品溶液 ①麥冬:取麥冬水溶液(1∶1)1.0ml,加于D101大孔樹脂柱中(Φ0.5×10cm),用蒸餾水洗脫,收集洗脫液100ml,水浴上濃縮、定容至50ml,臨床用前用0.4μm濾膜過濾。②紅參:稱取紅參總皂甙提取物41.90mg,用適量蒸餾水溶解,加于D101大孔樹脂柱中(Φ0.5×10cm),用蒸餾水洗脫,收集洗脫液50ml,置水浴上濃縮定容至10ml。濾過。

   2.2 測定方法 精密吸取上述供試品溶液各20μl,注入高效液相色譜儀,量取峰面積,以外標法計算樣品含量。

   2.3 標準曲線制備 精密吸取對照品溶液4,6,8,10,12,14μl,注入高效液相色譜儀中,每個點重復進樣3針,按上述色譜條件測定峰面積,取平均值。以峰面積為縱坐標,濃度C(μg/μl)為橫坐標,繪制標準曲線,回歸統計,結果如下。D-果糖的線性回歸方程為:Y=9.4760×10 3 X-8.5622×10 3 ;相關系數γ=0.9992D-Fru在3.20~11.20μg范圍內呈線性關系。D-葡萄糖的線性回歸方程為:Y=8.7538×10 3 X-1.2603×10 3 ;相關系數γ=0.9997D-Glu在5.36~18.76μg范圍內,呈線性關系。其中: X為對照品的濃度,Y為對照品的峰面積。

   2.4 穩定性考察 取供試品溶液分別為0,2,4,6,8h進樣,測得峰面積的RSD為0.63%,表明樣品溶液在8h內穩定。

   2.5 精密度實驗 取供試樣品溶液20μl,注入色譜儀,連續進樣5次,測得D-Fru和D-Glu的峰面積的RSD分別為0.76%和0.40%,表明進樣精密度良好。

   2.6 重現性實驗 取5份紅參總皂甙提取物樣品,按“2.1.2”項下方法制備供試品,各取20μl進樣,測含量。D-Fru和D-Glu含量的RSD分別為1.10%和0.65%,表明重現性好。

   2.7 加樣回收率實驗 取已知含量的麥冬水溶液樣品5 份,分別加入一定量的葡萄糖對照品,再分別加入D101大孔樹脂中(Φ0.5×10cm),用蒸餾水洗脫,收集洗脫液100ml,置水浴上濃縮,定容至50ml。臨用前用針筒式濾膜濾過,取20μl進樣,測含量。見表1。表1 加樣回收率實驗結果樣品(略)?

   2.8 樣品含量測定結果 按“2.1.2”項下方法制備供試品,取20μl進樣,測定結果見表2、表3。表2 紅參總皂甙提取物中糖的含量 (略)

   3 討論

   3.1 紅參總皂甙總提取物、麥冬水溶液為配制參麥凍干粉針的中間體,其糖的含量對成品的成型及質量有重要影響,因此需要檢測。

   3.2 糖類在紫外光區基本無吸收,無法用紫外檢測器檢測,而在示差中有較強吸收,因此選用示差折光檢測儀。色譜柱經C18柱與NH2柱比較,NH2柱分離效果好,選用 [2,3] 。

   3.3 樣品前處理采用醋酸鉛沉淀和大孔樹脂分離兩種方法,經實驗比較,發現醋酸鉛處理后,雜質不易除凈,雜質峰較多,干擾大,而大孔樹脂分離方法,凈化效果好,雜質峰幾乎無,故選用大孔樹脂分離作前處理方法。

   3.4 從測定結果可看出,紅參總皂甙中Glu與Fru相差不多,而在麥冬中Fru是Glu的10倍量。

   3.5 采用高效液相色譜測定紅參、麥冬中糖的含量,回收率、線性、精密度均符合分析要求,方法準確、簡便、快速、重現性好。

   參考文獻

   1 苗明三,李振國.現代實用中藥控制技術,北京:人民衛生出版社,2000,482.

   2 王桂有.含丹參葡萄糖注射液中葡萄糖含量測定方法研究.現代中藥研究與實踐,2003,17(5):44.

   3 崔秀明.三七糖類成分的含量及其量化.現代中藥研究與實踐,2003,增刊,21.

日期:2005年8月4日 - 來自[中醫中藥]欄目

色譜儀器檢定標準

 

  色譜儀檢定的特點
  A) 檢定時間長
  檢定一臺色譜儀一般需要3-5個小時,時間較長。色譜儀在運行前首先要進行1-2小時的預熱,否則儀器的基線難以穩定。另外在在檢定過程中,基線和重復性的檢定也都需要較長的時間。
  B) 儀器型號繁多、操作復雜
  色譜儀在運行前,需要更換色譜柱、流動相,啟動泵和檢測器,并對衰減、流速、紙速等進行設置,所以操作比較復雜。另外,色譜儀的型號比較多,各種型號色譜儀的操作界面都不盡相同,尤其是計算機工作站的引入,使得各種型號色譜儀的操作差別更大。
  C) 維修困難
  色譜儀的內部電路非常復雜,而且零部件的更換必須使用相應廠家生產的配套產品,因而維修比較困難。
  D) 標準物質是主要的計量裝置
  不論是氣相色譜儀,還是液相色譜儀,基線噪聲、基線漂移、最小檢測濃度都是三個最重要的指標,而對它們的檢定只需使用標準物質即可進行
  E) 分布不均衡
  色譜儀檢定的方法
  1、液相色譜儀
  實驗室液相色譜儀是由輸液系統、進樣器、色譜柱、檢測器和數據記錄處理裝置等幾部分組成的分析儀器。圖3是典型的液相色譜儀組成方框圖。它利用樣品中各組分在色譜柱中固定相和流動相間分配系數或吸附系數的差異,將各組分分離后進行檢測,并根據各組分的保留時間和響應值進行定性、定量分析。
  主要檢定項目:
  泵流量設定值誤差SS、流量穩定性誤差SR
  檢定輸液系統
  定性、定量重復性
  最小檢測濃度、基線噪聲、基線漂移
  關于最小檢測濃度的檢定,規程規定“在靜態條件下,用注射器注入標準物質”然后用最小檢測限公式計算,得出結論(所謂靜態條件,即在不開泵的情況下,把樣品直接注入樣品池)。但由于近年來液相色譜儀結構設計有了較大的改變,尤其是計算機工作站的引入,使它的超作方式更為簡化。因而,原來規程所規定的檢測方法已不在適用。對于它的檢定應在動態條件下(即正常的開機進樣情況),注入20ΜL標準物質,然后用最小檢測限公式進行計算。若儀器的進樣筏小于20ΜL應把測得的峰高換算成20ΜL時的峰高(20ΜL/進樣筏容量*所測峰高)。以上測量方法與即將出版的液相色譜儀新檢定規程上的方法是相同的。
  至于基線噪聲和基線漂移按照規程所規定的條件對儀器進行設定后,使儀器空走半小時即可在色譜圖中讀出。單位AU是一個紫外吸收的單位,一般它與單位MV是相對應的,如果儀器色譜圖上顯示的單位是MV,可以通過查找儀器說明書找到換算關系。
  檢定原理:依據JJG705-90《實驗室液相色譜儀計量檢定規程》。
  檢定周期:兩年
  2、氣相色譜儀
  氣相色譜儀是根據試樣中各組分在氣固或氣液兩相間的吸附或分配系數的不同隨載氣移動而進行分離的儀器。分離后的組分按保留時間的先后順序進入檢測器,并自動記錄檢測信號,依據組分的保留時間和響應值進行定性、定量分析。氣相色譜儀由氣源、氣路控制系統、進樣系統、色譜柱、檢測器、電氣系統、記錄及處理系統組成。
  主要檢定項目:載氣流速穩定性、柱箱溫度穩定性、基線噪聲、基線漂移、靈敏度、檢測限
  檢定原理:依據JJG700-1999《氣相色譜儀計量檢定規程》。
  檢定周期:2年

 

日期:2005年8月4日 - 來自[中藥研究與新藥申報]欄目

液相色譜柱使用及保養

 

  液相色譜儀由高壓液體泵、檢測器及液相色譜柱等三部分組成,其中液相色譜柱的正確安裝和使用,是液相色譜工作的關鍵;也是液相色譜工作者獲得正確可靠的實驗數據的必經之路。
  一、液相色譜柱的安裝:
  1、液相色譜柱的結構:
  a、空柱由柱接頭、柱管及濾片組裝而成。
  柱接頭采用低死體積結構,柱接頭是兩端螺紋組件,一端是為7/16英寸外螺紋,另一端是3/16英寸的內螺紋(國內外已規范化)。7/16英寸外螺紋與1/4英寸柱管(Φ6.35mm)連接,中間放置壓壞用于密封。3/16英寸的內螺紋與1/16英寸(Φ1.57mm)的連接管連接,中間也放置壓環用于柱接頭的密封。為了盡量減少柱外死體積,在安裝色譜柱時,用Φ1.57mm連接管通過空心螺釘壓環后要盡量插到底,然后再擰緊空心螺釘。壓環被空心螺釘擠壓變形后緊箍在連接管上(連接管通過壓環后露出的管長度應嚴格控制在2.5mm長或其他固定尺寸)。
  在兩端柱接頭內,柱管兩端各放置一片不銹鋼濾片(或濾網),用于封堵柱填料不被流動相沖出柱外而流失。空柱各組件均為316#不銹鋼材質,能耐受一般的溶劑作用。但由于含氯化物的溶劑對其有一定的腐蝕性,故使用時要注意,柱及連接管內不能長時間存留此類溶劑,以避免腐蝕。
  b、柱填料:
  液相色譜柱的分離作用是在填料與流動相之間進行的,柱子的分類是依據填料類型而定。
  正相柱:多以硅膠為柱填料。根據外型可分為無定型和球型兩種,其顆粒直徑在3—10
  μm的范圍內。另一類正相填料是硅膠表面鍵合—CN,-NH2等官能團即所謂的鍵合相硅膠。
  反相柱:主要是以硅膠為基質,在其表面鍵合十八烷基官能團(ODS)的非極性填料。也有無定型和球型之分。
  常用的其他的反相填料還有鍵合C8、C4、C2、苯基等,其顆粒粒徑在3—10 μm之間。
  2,色譜柱的安裝:
  a、拆開柱包裝盒,確認色譜柱的類型、尺寸、出廠日期以及柱內貯存的溶劑。
  b、擰下柱兩端接頭的密封堵頭放回包裝盒供備用。
  c、 按柱管上標示的流動相流向,將色譜柱的入口端通過連接管與進樣閥出口相連接(如條件允許,建議在柱前使用保護柱);柱的出口與檢測器連接。連接管是外徑為1.57mm、內徑為0.1-0.3mm的不銹鋼管。連接管的兩端均有空心螺釘及密封用壓環。在接管時一定要設法降低柱外死體積。連接管通過空心螺釘、壓環后盡量用力插到底,然后順時針擰緊空心螺釘,直到擰不動為止,再用扳手繼續順時針擰1/4-1/2圈,切記不要用力過大。如色譜柱通過流動相加壓后有漏液現象,請用扳手繼續順時針擰1/4圈,直至不漏液為止。
  二、液相色譜柱的使用:
  色譜柱在使用前,最好進行柱的性能測試,并將結果保存起來,作為今后評價柱性能變化的參考。但要注意:柱性能可能由于所使用的樣品、流動相、柱溫等條件的差異而有所不同;另外,在做柱性能測試時是按照色譜柱出廠報告中的條件進行(出廠測試所使用的條件是最佳條件),只有這樣,測得的結果才有可比性。
  1、樣品的前處理:
  a、最好使用流動相溶解樣品。
  b、使用予處理柱除去樣品中的強極性或與柱填料產生不可逆吸附的雜質。
  c、使用0.45μm的過濾膜過濾除去微粒雜質。
  2、流動相的配制:
  液相色譜是樣品組分在柱填料與流動相之間質量交換而達到分離的目的,因此要求流動相具備以下的特點:
  a、流動相對樣品具有一定的溶解能力,保證樣品組分不會沉淀在柱中(或長時間保留在柱中)。
  b、流動相具有一定惰性,與樣品不產生化學反應(特殊情況除外)。
  c、流動相的黏度要盡量小,以便在使用較長的分析柱時能得到好的分離效果;同時降低柱壓降,延長液體泵的使用壽命(可運用提高溫度的方法降低流動相的黏度)。
  d、流動相的物化性質要與使用的檢測器相適應。如使用UV檢測器,最好使用對紫外吸收較低的溶劑配制。
  e、流動相沸點不要太低,否則容易產生氣泡,導致實驗無法進行。
  f、在流動相配制好后,一定要進行脫氣。除去溶解在流動相中的微量氣體既有利于檢測,還可以防止流動相中的微量氧與樣品發生作用。
  3、流動相流速的選擇:
  因柱效是柱中流動相線性流速的函數,使用不同的流速可得到不同的柱效。對于一根特定的色譜柱,要追求最佳柱效,最好使用最佳流速。對內徑為4.6mm的色譜柱,流速一般選擇1ml/min,對于內徑為4.0mm柱,流速0.8ml/min為佳。
  當選用最佳流速時,分析時間可能延長。可采用改變流動相的洗滌強度的方法以縮短分析時間(如使用反相柱時,可適當增加甲醇或乙腈的含量)。
  注意:
  a.由于甲醇廉價,對于反相柱推薦使用甲醇體系(必須使用乙腈的場合除外)。
  b.對于正相柱推薦使用沸程為30-60℃的石油醚或提純后的己烷作流動相,沒有提純的己烷不得使用。用水最好使用超純水(電阻率大于18兆歐),去離子水及雙蒸水中含有酚類雜質,有可能影響分析結果。
  c.含水流動相最奸在實驗前配制,尤其是夏天使用緩沖溶液作為流動相不要過夜。最好加入疊氮化鈉,防止細菌生長。
  d.流動相要求使用0.45 μm濾膜過濾,除去微粒雜質。
  e.使用HPLC級溶劑配制流動相,使用合適的流動相可延長色譜柱的使用壽命,提高柱性能。
  4、柱性能測試:
  啟動液相色譜儀:a、流動相流速設定為1ml/min。
  b、UV檢測器波長設定為254nm。
  使用出廠測試時使用的流動相組成及測試樣品。
  記錄并計算測試結果。

 

日期:2005年8月4日 - 來自[中藥指紋圖譜]欄目

高效液相色譜 HPLC 在中藥質量控制中的應用

  【摘要】 為了更好地制定中藥現代化的質量標準,探討高效液相色譜(HPLC)在中藥質量控制中的應用,發現HPLC在中藥質量控制中正發揮著積極作用,其樣品提取,色譜條件選擇等都有獨特的特點;并且發現正相高效液相色譜,反相高效液相色譜等多種色譜在中藥質量控制中發揮著不同作用。 

  關鍵詞 HPLC 中藥質量
     
  由于國際知識產權,藥品專利的保護,復關等一系列經濟、政治因素,中藥走向世界面臨新的機遇和挑戰
。一方面,由于氣候、環境、社會、飲食等因素的影響,疾病譜發生了很大的變化,加之藥源性疾病、營養性疾病、老年人疾病的增加,而化學藥物療效的欠佳或影響;某些藥物的毒副作用與耐藥性表現很突出,人們在“回歸大自然”的熱浪下,掀起了“中醫中藥熱”。另一方面由于中藥成份復雜,缺乏明確的有效成份含量標準和制藥標準等原因,使中藥一直沒有得到合法地位。中藥產品多以保健品、增補劑或食物添加劑等在市場流通,中醫藥在新的熱浪沖擊下,如何面對嚴峻的挑戰。求生存、求發展,參與國際競爭是國人應該引起重視的研究課題 [1]  。

    建立與現代化科學技術相適應的中藥質量控制方法,是實現中藥生產現代化非常關鍵的一環,多年以來,在這方面已對它們進行了大量的工作,并已取得明顯的成績,但至今仍有不少中藥沒有質量控制方法或方法不夠理想。近年來HPLC分析法發展很快,應用日益普遍,它具有靈敏度高,分離效率高,易于操作和重復性好等特點,是對中藥進行成分分析的一種極有價值的分析技術。在中藥成分的含量測定、物種鑒別、藥材加工炮制、采收和儲存等方面已有大量的工作報道,因此成為中藥質量控制的重要手段之一。如今HPLC在中藥質量控制方面,正處于全面開花階段,大量文獻爭先報道,除了正相色譜外,反相色譜也得到廣泛應用,并且出現了離子對高效液相色譜、智能多柱高效液相色譜和絡合高效液相色譜的應用。

    1 高效液相色譜在中藥質量控制中的應用

    高效液相色譜在中藥研究方面,早期主要用于中藥化合物化學成分的分析。例如1978年賀賢國等從中華五味子中分離得到五味子甲、五味子乙、五味子丙,解決了薄層層析檢查只有一個斑點,但藥理實驗毒性不穩定的問題 [2]  。1983年張紅、賀賢國等對早期HPLC在中藥研究中的應用作了一定的概述 [3]  。

    由于HPLC具有適用范圍廣,分離效率高,流動相和分析柱使用方式及填料選擇方便等特點,與其它傳統的分析分離手段和儀器檢測相比具有突出的優越性。使HPLC在中藥質量控制方面出現了繁榮景象。1999年1月~10月有關文獻報道達100多篇,并引起許多大型研究機構的關注。中國醫學科學院、協和醫科大學藥物研究所與日本大正制藥株式會社合作開展了中藥高效液相色譜分析與質量評價的系列研究,完成了80個中草藥的高效液相色譜分析及質量考查工作 [4]  。為HPLC在中藥的質量控制發揮積極作用提供了依據,開拓了廣闊空間。

  在《中國藥典》中,HPLC在質量控制中也發揮越來越重要的作用,表1是高效液相色譜在歷版藥典中的應用 [5]  。

  表1 HPLC在歷版藥典中含量測量方法的統計比較 略

  其中在中藥應用方面相對落后,1995版《中國藥典》中398個中藥制劑中僅有小兒消炎栓、護肝片、愈風定心片等少數品種應用HPLC [6]  ,但在2000年版藥典中,明顯增大了HPLC的應用力度。有92個中藥品種利用HPLC測定含量,其中藥材47個,中藥制劑45個。

    HPLC在中藥質量控制中主要用于有效成份含量測定。其常用程序和方法如下:

  (1)試樣的提取:藥材及中藥制劑在測定前應根據其劑型和待測成分的理化性質,選擇適當的溶劑和提取方法,將待測成分從劑型中提取出來。①方劑:小丸和沖劑研成細粉;藥材粉末,散劑直接取樣,準確稱取適量,選擇適當溶媒。常用甲醇或乙醇,浸泡一定時間,超聲波振蕩后提取或加熱回流提取。②口服液:常用有機溶媒萃取,或者取適量口服液拌入適量硅藻土,混勻,干燥后用超聲波振蕩提取或索氏提取。③蜜丸:先剪碎,稱取一定量,拌入適量硅藻土研勻,干燥,再根據待測成分選擇適當溶劑提取。

    (2)試樣純化:①過大孔樹脂柱,可除去糖的干擾。②用聚酰胺柱純化黃酮類成分。③生物堿類,先調pH值至堿性,再用氯仿提取。④過氧化鋁和活性炭混合柱,可除去試樣中少量雜質及色素。⑤用濾膜過濾或過PT系列色譜預處理小粒。

    (3)色譜條件的選擇:①色譜柱:常用YWK、YBK、C18。②流動相:常用甲醇-水、甲醇-水-冰醋酸、甲醇-正已烷等。③檢測器:多為紫外檢測器,根據組分的吸收度,選擇最佳波長。

    (4)定量方法:定量方法為內標法和外標法,由于中藥制劑成分復雜,出峰多且密,故多采用外標法。以試樣的標準品作對照物質,相對比較以求得試樣的含量,常用工作曲線法和外標一點法。

    2 反相高效液相色譜法在中藥質量控制中的應用

    反相高效液相色譜法是HPLC應用最廣的一個分支。反相鍵合相色譜,又稱極性鍵合相色譜。鍵合相表面都是極性很小的烴基,如十八烷基硅烷鍵合硅膠(ODS或C18)而洗脫液大多采用強極性溶劑或無機鹽緩沖液。在這種鍵合相色譜中,洗脫順序恰好與正相色譜相反,即極性大的化合物先洗脫,極性小的化合物不易洗脫。因為鍵合相表面的官能團不易流失,溶劑的極性可以很大范圍內調整,因此應用范圍很寬,加之由其派生的反相離子對色譜法與離子抑制色譜法,可以分離有機酸、堿和鹽等離子化合物,擴大應用范圍 [7]  。近年來反相高效液相色譜在中藥質量控制方面得到廣泛應用。考查1998~1999年100篇HPLC應用于中藥含量測定的文章中有29個用的是反相高效液相色譜。反相高效液相色譜柱:常用C18柱,柱長15~30cm,填料粒度5~10μm。流動相:甲醇-水,乙腈-水,甲醇-磷酸鹽,乙腈-硫酸鹽。可適當調節組分的配比和流動相的pH,個別流動相中添加離子對試劑。檢測器多為紫外檢測器。定量方法有內標法和外標法。

    3 其它高效液相色譜在中藥質量控制中的應用

    3.1 智能多柱高效液相色譜 智能多柱高效液相色譜是在多柱切換高效液相色譜及智能化技術的基礎上提出的新概念,根據分析樣品成分繁多、性質復雜等特點,利用切換技術的模塊或分離性能,把樣品分塊地切換進不同性質的色譜柱,再用合適的流動相洗脫。全過程采用智能化控制。智能多柱高效液相色譜可以較好地解決中藥成分復雜,難以全面掌握其他成分,特別是有效成分而不便于控制其質量的問題,是中藥質量控制較全面和先進的技術 [8]  。

    3.2 絡合高效液相色譜 絡合高效液相色譜是通過形成絡合物,利用HPLC來分離和測定無機物的方法,絡合高效液相色譜具有靈敏度高,選擇性好,能多元同時測定,并可進行價態分開法分析等特點 [9]  。中藥及中藥制劑中含有大量微元素與重金屬,一方面這些微量元素參與了藥物的作用,是中藥發揮獨特療效不可或缺的一部分;另一方面,由于有害重金屬的存在,增加了中藥的毒副作用,影響了中藥的國際化進程。絡合高效液相色譜在這方面的有益探索具有積極作用。

    中藥質量控制是中藥生產現代化的重要環節之一,是中藥走向世界的重要保證,HPLC在此方面正發揮積極作用。但我們也要看到由于中藥成分復雜,作用機制復雜,單純測定幾個指標并不能完全解決問題。如何發揮HPLC的優越性,不斷提高中藥質量有待進一步的研究。

    4 高效液相色譜在中藥質量控制中的應用部分實例

  4.1 藥材 洋金花(東莨菪堿) [10]  。

    4.2 口服液 清熱解毒口服液(黃芩甙) [11]  ,蛇膽川貝液(膽酸) [12]  。

    4.3 注射液粉針劑 丹參粉針劑(丹參素) [13]  ,雷公藤(雷公藤甲素) [14]  。

    4.4 片劑 復方黃連素片(鹽酸小檗堿) [15]  ,三七片(人參 皂甙Rg) [16]  。

    4.5 丸劑 開胸順氣丸(橙皮苷) [17]  。

  4.6 沖劑 胃脘舒沖劑(甘草酸) [18]  。

    4.7 膠囊 天舒膠囊(天麻素) [19]  ,胃利膠囊(橙皮苷) [20]  。

  參考文獻

    1 潘旭初.面向21世紀中藥新藥的研究與開發.時珍國藥研究,1998,9(1):5.

    2 賀賢國.植物學報,1978,20(1):77.

    3 張仁斌.高效液相色譜在醫藥研究中的應用,上海:上海科技出版社,1983,1.

    4 中國醫學科學院.常用中草藥高效液相色譜分析.北京:科學出版社,1999.

    5 李珍.從歷版中國藥典分析方法的統計與研究看我國藥物分析方法的發展.藥物分析雜志,1998,18(5):349.

  6 《中國藥典》95年版.

    7 楊軍.反相高效液相色譜在中藥質量控制中的應用.時珍國藥研究,1998,9(2):126.

    8 趙芝蘭.智能多柱高效液相色譜系統及其在中藥質量控制中的作用.藥學實踐雜志,1998,16(2):97.

    9 李華斌.絡合高效液相色譜法及應用.中國衛生檢驗雜志,1998,8(2):123.

    10 何靜.HPLC測洋金花藥材中東莨菪堿含量.藥物分析雜志,1999,19(3):174.

    11 竇英.HPLC測清熱解毒口服液中黃芩甙含量.中醫藥信息,1999,16(3):57.

    12 倪坤儀.RP-HPLC測蛇膽川貝液中膽酸含量.藥物分析雜志,1993,13(1):3.

    13 關大衛.反相高效液相色譜法測丹素粉針劑中丹參素含量.藥物分析雜志,1994,14(30):36.

    14 胡永勝.高效液相色譜梯度法測雷公藤制劑中雷公藤甲素的含量.色譜,1999,17(3):265.

    15 何興官.HPLC測復方黃連素片中鹽酸小檗堿的含量.華西藥學雜志,1999,14(2):123.

    16 任世才.RP-HPLC法測三七片中人參皂甙Rg含量.中成藥,1996,18(4):14.

    17 林翠英.反相HPCL測定開胸川靈氣丸中橙皮甙的含量.天津藥學,1999,11(1):64.

    18 朱蘭.高效液相測定胃脘舒沖劑中甘草酸的含量.中草藥,1999,30(5):339.

    19 劉金德.HPLC測天舒膠囊中天麻素含量.時珍國醫藥,1999,10(4):246.

    20 王曉風.高效液相色譜測定胃利膠囊中橙皮苷的含量.藥物分析雜志,1999,19(3):190.    

  作者單位:516500廣東廣州解放軍廣州軍區藥檢所   

    (收稿日期:2004-03-19)

    (編輯日 強) 

日期:2005年8月3日 - 來自[綜述]欄目
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