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肺炎患兒肺炎支原體感染的三種實驗室檢測方法比較

來源:INTERNET 作者:殷勇 肖潔 2005-7-21

摘要: 【摘要】 目的 探討早期診斷肺炎支原體的實驗室方法。方法 對72例疑似支原體感染的患兒同時進行明膠顆粒法、聚合酶鏈反應法(PCR)和免疫熒光法檢測肺炎支原體,評估三種方法的應用價值。PCR法檢測需昂貴設備,操作復雜,不易普及。明膠顆粒法3h即能出報告,無需特殊儀器設備即可操作,可作為支原體肺炎實驗室診斷的常規......


  【摘要】 目的 探討早期診斷肺炎支原體的實驗室方法。方法 對72例疑似支原體感染的患兒同時進行明膠顆粒法、聚合酶鏈反應法(PCR)和免疫熒光法檢測肺炎支原體,評估三種方法的應用價值。結果 明膠顆粒法和PCR法敏感性分別為58.7%和52.2%,在檢出率上差異無顯著性(P>0.05)。免疫熒光法與明膠顆粒法比較敏感性明顯下降,只有26.1%,兩者在檢出率上差異有顯著性(P<0.05)。PCR法檢測需昂貴設備,操作復雜,不易普及。明膠顆粒法3h即能出報告,無需特殊儀器設備即可操作,可作為支原體肺炎實驗室診斷的常規檢測。結論 將明膠顆粒法和PCR法相結合,MP在確診為支原體肺炎中的檢出率可提高為93.5%,有利于早期、迅速、高效提高MP感染的檢出率。

  關鍵詞 肺炎支原體 明膠顆粒法 聚合酶鏈反應法 免疫熒光法

  肺炎支原體(Mycoplasma pneumonia)是急性呼吸道感染的常見病原體之一。近年來,已成為兒童肺炎的常見病原菌,其引起的呼吸道感染日趨增多。肺炎支原體感染引起的肺炎,由于肺部體征輕,容易造成臨床漏診;更因為其病理形態可呈各種類型,易誤診為細菌或病毒感引起的肺炎,在無實驗室依據時,難以與其他病原菌進行鑒別。故早期診斷、及時治療非常重要。我們對2003年5月~2004年1 月收治入院的疑似支原體感染的72例肺炎患兒同時進行了明膠顆粒法、聚合酶鏈反應法(PCR)和免疫熒光法檢測,觀察早期診斷肺炎支原體感染的臨床價值。

  1 資料與方法

  1.1 一般資料 2003年5月~2004年1月收治入院的疑似肺炎支原體感染的72例肺炎患兒,男45例,女27例,男∶女=1.7;年齡12個月~16歲,平均年齡(6.6±3.6)歲。

  1.2 臨床表現發熱72例(100%),咳嗽67例(93.1%),咳痰49例(68.1%),嘔吐11例(15.3%),流涕6例(8.3%),腹瀉5例(6.9%),頭痛4例(5.6%),咽痛4例(5.6%),氣急3例(4.2%),腹痛2例(2.8%),胸痛1例(1.4%)。肺部有羅音17例(23.6%)。一過性血尿2例(2.8%),一過性蛋白尿1例(1.4%),肝功能谷丙轉氨酶升高1例(1.4%)。胸片呈片狀滲出56例(77.8%),肺紋理增多模糊16例(22.2%),胸腔積液1例(1.4%)。

  1.3 實驗方法

  1.3.1明膠顆粒法 抽取外周血采用日本富士MYCO-Ⅱ試劑盒測定MP-IgM抗體,結果判定1∶40為臨界值,滴度≥1∶80者為陽性。

  1.3.2 聚合酶鏈反應法(PCR) 滅菌棉簽咽部取樣采用中山醫科大學安達基因診斷中心開發的MP-DNA檢測試劑盒進行PCR測定。PCR擴增及定量儀為美國產Gene Amp5700Sequence Detedtion System基因擴增儀。MP-DNA擴增及檢測按照試劑盒說明書進行。

  1.3.3 免疫熒光法 抽取外周血按《中華醫學檢驗全書》中“免疫熒光法”進行操作,IgM在1∶4以上,IgG>1∶16有診斷意義。

  1.4 統計學分析 采用SPSS10.0軟件進行分析。

  2 結果

  三種不同方法檢測肺炎支原體的比較見表1。明膠顆粒法檢測72例肺炎患兒。MP檢出28例,其比例為38.9%。按年齡分組,2歲以下、2~6歲、7~16歲三組肺炎患兒分別為8例、30例和34例,各組MP陽性分別為2例(25.0%)、13例(43.3%)和13例(38.2%)。男性45例肺炎,MP陽性19例,占42.2%;女性27例肺炎,MP陽性9例,33.3%。男女感染MP差異無顯著性(P>0.05)。

  表1 三種不同方法檢測肺炎支原體的比較

  注:明膠顆粒法與PCR法比較P>0.05,明膠顆粒法與免疫熒光法比較P<0.05

  通過檢測,最終確定為肺炎支原體感染的有46例,26例為非肺炎支原體感染。三種不同方法的敏感性見表2。

  表2 三種不同方法檢測肺炎支原體的敏感性比較項目 明膠顆粒法 PCR法 免疫熒光法敏感性58.7%(27/46) 52.2%(24/46) 26.1%(12/46)

  3 討論

  MP肺炎的臨床表現多種多樣,嚴重可呈爆發性肺炎,迅速發展,最終呼吸衰竭死亡。隨著臨床檢驗技術的發展, 人們發現MP感染在兒童中的感染率不斷增加。文獻報道小兒MP肺炎占全部肺炎的5%~10% [1] 。病原體培養,需要2~3周的時間,難以應用于臨床,并且檢出率不高;以往臨床依賴血冷凝集試驗進行診斷,但病程在1周以上才會有陽性的結果,而且與其他感染有一定的交叉反應;無法滿足早期診斷和早期治療的目的。我們運用3種不同的方法進行MP的檢測,明膠顆粒法和PCR法都能獲得較滿意的結果,兩者的敏感性分別為58.7%和52.2%,在檢出率上差異無顯著性(P>0.05)。由于所有72例標本采集的時間75%(54/72)在病程的4天以內,從而達到了早期診斷的要求。免疫熒光法與明膠顆粒法比較敏感性明顯下降,只有26.1%,兩者在檢出率上差異有顯著性(P<0.05)。PCR法雖然具有實驗時間短、敏感性高、不存在交叉反應和放射性污染等特點,但需昂貴設備,操作復雜,不易普及。明膠顆粒法用日本富士公司提供的試劑盒,運用表面吸附支原體抗原的明膠顆粒代替動物紅細胞,消除了非特異性反應,且3h即能出報告,無需特殊儀器設備,即可操作,可作為支原體肺炎實驗室診斷的常規檢測,以利于早期做出診斷 [2] 。本文明膠顆粒法血清MP陽性率為37.5%(27/72),略高于文獻報道的21.3%陽性率 [3] ,可能與我們針對性的選擇病例有關。然而本文有16例明膠顆粒法陰性,PCR法陽性,其中有9例在病程第1天進行標本檢測,有7例臨床表現輕微,胸片改變范圍較小,提示明膠顆粒法的陽性率與病程、部位、嚴重程度有關。本文PCR法咽拭子物中MP陽性率為33.3%(24/72),而文獻報道的陽性率為26% [4] 和75.7%,陽性率差異可能與流行周期的出沒有關。本文有19例PCR陰性,明膠顆粒法陽性,其中有10例在入院之前已使用過大環內酯類藥物,提示PCR法可能與敏感藥物的治療有關,當然還要考慮PCR污染產生假陽性的因素。將明膠顆粒法和PCR法相結合,MP在確診為支原體肺炎中的檢出率可提高為93.5%(43/46)。在臨床治療中常規抗生素治療效果不理想高度懷疑支原體感染,或遇到重癥病例需要快速診斷病原時,可考慮同時選用明膠顆粒法和PCR法檢測MP,有利于早期、迅速、高效提高MP感染的檢出率。

參考文獻

  1 余善昌.有關支原體感染的幾個問題.實用兒科雜志,1993,8(3):209.

  2 張玨,樂華文.三種肺炎支原體血清學檢測方法比較.中華現代臨床醫學雜志,2003,(12):56.

  3 陳蘭舉,潘家華.小兒肺炎支原體感染研究進展.蚌埠醫學院學報,2000,25(1):73.

  4 李延壯,楊洪江,張燁.聚合酶鏈式反應診斷肺炎支原體特異性、靈敏性及咽拭子物標本檢測研究.實用兒科雜志,1993,8(3):211.

  作者單位:200127上海第二醫科大學附屬新華醫院上海兒童醫學中心

  (收稿日期:2004-04-04)

  (編輯秋 實)



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