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ELISA試劑“花板”問題的出現與分析

來源:INTERNET 作者:云華 丁齊虹 班美蓮等 2005-7-25

摘要: 我們在使用ELISA試劑進行血液HBsAg-HCV-HIV及梅毒等各項檢驗的過程中,經常發現空白和陰性,陽性對照以及室內質控孔(衛生部臨檢中心提供,HBsAg0。標本的陽性率很高,每板除對照孔外,有時陽性高達10孔之多,而大多數真陽性標本都出現弱陽性結果。這就是試驗中所說的“花板”問題。 1 標本、試劑、儀器 1。...


    我們在使用ELISA試劑進行血液HBsAg-HCV-HIV及梅毒等各項檢驗的過程中,經常發現空白和陰性,陽性對照以及室內質控孔(衛生部臨檢中心提供,HBsAg0.5ng1ng-HCV-HIV梅毒均為2NCU)結果正常,而血液標本孔的OD值卻比較高(大多數OD值≥0.070)。標本的陽性率很高,每板除對照孔外,有時陽性高達10孔之多,而大多數真陽性標本都出現弱陽性結果。這就是試驗中所說的“花板”問題。這種現象對檢驗結果的正常判斷造成了很大的影響。我們在試驗中,針對這種“花板”現象進行了認真的分析及判斷。總結如下。

  1 標本、試劑、儀器

    1.1 標本 出入境人員的血液標本。

    1.2 試劑 HBsAg、HCV、HIV、梅毒試劑均為不同廠家的ELISA試劑。

    1.3 儀器 LD4-2型腦心機BID RAD1575型洗板機BID RAD550酶標儀。

    2 方法

  所有被檢出入境人員的血液標本,按照各個廠家提供的ELISA試劑說明書進行HBsAg-HCV-HIV梅毒等檢驗項目操作。所有試劑均在有效期內使用。

    3 結果

  所使用不同廠家的試劑有時會出現“花板”問題。

    4 分析

  在所有標本進行檢測的過程中,所用的儀器及加樣過程都處于正常狀態的情況下,步驟均按照各種試劑說明書的要求去做,排除實驗所用儀器和操作步驟對實驗結果的影響外,試劑盒內的空白、陰性和陽性對照以及室內質控值都很正常,只有檢測的血液標本情況異常。根據國家和疾控中心報告陽性率的比例不應該是很高的情況下,HBsAg在用ELISA之前都經過了快速金標試劑的檢測,陽性標本得到了一定的控制。因此,原因可能是在標本的處理,特別是放置時間、離心速度和離心時間方面的問題。所以,標本的處理就成為實驗結果的主要可疑因素。

    為了避免“花板”問題的出現,降低檢測的假陽性率,獲得更理想的實驗結果,首先在選擇ELISA試劑時,應選擇靈敏度高、特異性好、穩定性好、批間差小、操作方便省時的試劑。并在檢驗的過程中應采取下列措施:(1)抽取樣本時應抽出足夠檢驗量的血液標本,按比例加抗凝劑,便于離心,得到足夠的血清(血漿)。(2)血液標本應置于室溫下1~2h,使血液凝固收縮,然后離心檢測或讓血液過夜后再檢測。這樣才能使得血液充分收縮,讓標本中的非特異性物質所致的假陽性率降至最低。(3)檢測之前,加大離心轉速,盡量延長時間,使血細胞和纖維蛋白充分沉淀,讓血細胞與血清徹底分離。(4)加樣時不能加入紅細胞或纖維蛋白,要按照操作說明書去做,否則會影響實驗結果。(5)封板溫育時,各孔一定要封嚴,防止陽性標本的液體蒸發,產生周邊現象從而導致“花板”的出現。(6)手工洗板時應注意液體被濺出或孔與孔之間的液體溢出,連成整體液面后產生“花板”。用洗板機洗板時應防止針口有纖維蛋白或異物,這些異物在洗板的過程中易產生拖帶現象而導致“花板”的出現。

  (收稿日期:2004-08-29)

  作者單位:1010051內蒙古國際旅行衛生保健中心

  2010010內蒙古血液中心 

  (編輯秋 實)



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