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蛋白質吸收液—2%硼酸溶液的配制與使用方法的改進

來源:中華醫學研究雜志 作者:劉衷芳,王永潔 2006-12-18

摘要: 2%硼酸溶液是測定方法中堿化蒸餾時所使用的吸收液,用來吸收游離出的氨,然后用鹽酸或硫酸標準溶液滴定,根據混合指示劑顏色變化判斷終點。1 2%硼酸吸收液的配制方法 (1)將2份0。1%甲基紅乙醇溶液與1份0。1%次甲基藍乙醇溶液混合。...


  凱氏定氮法是測定蛋白質的國標方法。2%硼酸溶液是測定方法中堿化蒸餾時所使用的吸收液,用來吸收游離出的氨,然后用鹽酸或硫酸標準溶液滴定,根據混合指示劑顏色變化判斷終點。

  1  試劑與方法

  1.1  2%硼酸吸收液的配制方法  (1)將2份0.1%甲基紅乙醇溶液與1份0.1%次甲基藍乙醇溶液混合。(2)將適量上述混合指示劑一次性加入已配制好的2%硼酸溶液中,使溶液呈藍紫色。

  1.2  2%硼酸吸收液使用方法  按照國標方法(GB5009.5—85)操作,在平行試驗時,可將已滴定至終點的2%硼酸吸收液重復使用。

  1.3  配制方法  配制2%硼酸吸收液時,混合指示劑加入量不宜過多,以透過試劑瓶觀察藍紫色剛好透明為宜。若溶液偏藍,用0.1%甲基紅乙醇溶液調至藍紫色;反之若偏紫紅,可用0.1%次甲基藍乙醇溶液調至藍紫色。

  1.4  配制后的2%硼酸吸收液可行預試驗  即取少量吸收液于試管中,加入1滴氨水(1+2)觀察其顏色變化是否明顯與正常。

  1.5  反應原理  樣品中的蛋白質經硫酸和催化劑消化后,分解的氨與硫酸結合生成硫酸銨,然后堿化蒸餾使氨游離,用2%硼酸溶液吸收生成硼酸銨。其反應為:2NH3+4H3BO3→(NH4)2B4O7+5H2O使吸收液由酸性變為堿性,混合指示劑由藍紫色變為綠色,然后用鹽酸或硫酸標準溶液滴定,使混合指示劑再由綠色返至藍紫色即為終點。重復使用時,仍可按上述原理反應。

  1.6  終點顏色  滴定終點觀察顏色時,樣品消化液終點與空白消化液終點應色調一致。

  2  結果

  一次使用2%硼酸吸收液的國標方法與重復使用2%硼酸吸收液的新方法進行對照實驗,經t檢驗,t=0.676, P>0.05,兩種使用方法差異無顯著性。對照實驗結果見表1。

  表1  對照實驗結果(略)

  3  討論

  用一次性加入混合指示劑的方法配制2%硼酸吸收液,將已滴定至終點的吸收液重復使用,用于平行實驗。這樣可簡化實驗操作,尤其在進行批量樣品檢驗時,對于2%硼酸吸收液可不必逐個滴加混合指示劑,減少50%吸收次數,節約50%用量,從而提高工作效率和經濟效益。

  (編輯:李  木)

  作者單位: 150056 黑龍江哈爾濱,哈爾濱市疾病預防控制中心

 



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